DNA提取 ：一、p3xFLAG-CMV-10實(shí)驗(yàn)原理
DNA是遺傳信息的載體，是*重要的生物信息分子，因此DNA的提取也是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中*重要、*基本的操作之一。我公司提供從各種不同來源的樣品（如**、**、血液、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織及植物組織等）中提取高純度基因組DNA的服務(wù)。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1、細(xì)胞裂解
● CTAB法 CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基**基溴化銨）是一種陽(yáng)離子去污劑，可融解細(xì)胞膜，并與核酸形成符合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中（>0.7M NaCl）是可溶的，p3xFLAG-CMV-10通過有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。此法多用于植物組織、**等材料。
● SDS法 SDS是一種陰離子去污劑，高溫（55℃-65℃）下可裂解細(xì)胞，使蛋白變性、染色體解析。常用于血液、**、酵母、動(dòng)物組織、細(xì)胞等樣品基因組DNA的提取。
● 其他方法 物理方法如機(jī)械剪切、超聲波破碎、勻漿等，化學(xué)方法如異硫氰酸胍、堿裂解、蛋白酶K消化等。
2、DNA分離純化
● 用酚/氯仿抽提裂解液，收集水相，乙醇沉淀DNA，*后用TE溶解DNA沉淀。
3、DNA的定量及檢測(cè)
● p3xFLAG-CMV-10瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA片段的分子質(zhì)量。
● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度 DNA在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA。提取的基因組DNA樣品濃度＝OD260×50ug/ml×稀釋倍數(shù)。
● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA純度
一般用OD260/OD280值檢測(cè)DNA樣品的純度。OD260/OD280值約為1.7-1.9，說明DNA純度較好；若小于1.7有可能有蛋白污染；若大于2.0，說明有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。
三、p3xFLAG-CMV-10樣品處理
因細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含成分不同，樣品預(yù)處理的方法也有差異。不同樣品的預(yù)處理方法大致如下：
● 植物組織——液氮研磨
● 動(dòng)物組織——?jiǎng)驖{、液氮研磨
● 培養(yǎng)細(xì)胞——蛋白酶K消化
● 細(xì) 菌——溶菌酶消化
● 酵 母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
p3xFLAG-CMV-10注意：客戶*好提供新鮮的樣品或取樣后立即在低溫（-20℃或-70℃）冷凍保存的樣品，避免反復(fù)凍溶。
100mLXY100602干粉型LB培養(yǎng)基250gXY100820干粉型LB-Lennox培養(yǎng)基250gXY100821干粉型2×YT培養(yǎng)基250gXY100822干粉型SB培養(yǎng)基250gXY100813干粉型SOB培養(yǎng)基250gXY100823干粉型SOC培養(yǎng)基250gXY100825自誘導(dǎo)培養(yǎng)基(lac啟動(dòng)子)200mLXY100824干粉型TB培養(yǎng)基250gXY100826穿刺培養(yǎng)基10管XY100827菌種保存液10管(A)|10管(B)XY130895YPD液體培養(yǎng)基100mLXY130896YPG液體培養(yǎng)基100mLXY130897YPDG液體培養(yǎng)基100mLXY130898MAL指示劑培養(yǎng)基100mLXY130899GAL指示劑培養(yǎng)基100mLXY130901酵母生產(chǎn)及產(chǎn)孢培養(yǎng)基100mLXY130902酵母產(chǎn)孢培養(yǎng)基100mLXY120517零誘導(dǎo)培養(yǎng)基100mLXY120688放線菌酮溶液1mLXY120680放線菌素D溶液1mLXY120681可溶性兩性霉素B溶液1mLXY60206氨芐青霉素溶液10mLXY60101氨芐青霉素干粉1gXY120682桿菌肽溶液1mLXY120704博萊霉素溶液1mLXY120683羧芐青霉素鈉溶液1mLXY120684噻孢霉素溶液1mLXY120685先鋒霉素溶液1mLXY60102氯霉素干粉1gXY60207氯霉素溶液10mLXY120687環(huán)孢霉素A溶液1mLXY120686細(xì)胞松弛素B溶液0.1mLXY131234地塞米松溶液1mLXY120690紅霉素溶液10mLXY100838遺傳霉素(G418)干粉100mgXY100839潮霉素B干粉250mgXY120692硫酸慶大霉素溶液2mLXY60208硫酸卡那霉素溶液10mLXY60302硫酸卡那霉素干粉1gXY120693絲裂霉素C溶液1mLXY60203硫酸新霉素干粉1gXY120695新生霉素溶液5mLXY120694制霉菌素溶液10mLXY120696土霉素鹽酸鹽溶液10mLXY120697青霉素G鉀鹽溶液1MuXY120698青霉素G鈉鹽溶10mLXY120699多粘菌素 B 硫酸鹽5mLXY100840嘌呤霉素干粉25mgXY120700利福平溶液10mLXY131232壯觀霉素溶液10mLXY120701鏈脲佐菌素溶液10mLXY60210硫酸鏈霉素溶液10mLXY60209鹽酸四環(huán)素溶液10mLXY120702衣霉素溶液1mLXY60301鹽酸四環(huán)素干粉1gXY120703鹽酸萬古霉素溶液10mL
探針標(biāo)記及檢測(cè)
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