PDX封固劑技術(shù)服務(wù)
一、實驗原理
類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制。首先待擴增DNA模板加熱變性解鏈，隨之將反應(yīng)混合物冷卻至某一溫度，這一溫度可使引物與它的靶序列發(fā)生退火，再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。PDX封固劑這種熱變性-復(fù)性-延伸的過程就是一個PCR循環(huán)，PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。
二、實驗步驟
PCR擴增
PDX封固劑根據(jù)客戶的實驗?zāi)康?，進(jìn)行PCR反應(yīng)的優(yōu)化。
1、變性：高溫使雙鏈DNA解離形成單鏈（94℃，30s）。
2、退火：低溫下，引物與模板DNA互補區(qū)結(jié)合（55℃，30s）。
3、延伸：中溫延伸。DNA聚合酶催化以引物為起始點的DNA鏈延伸反應(yīng)（70～72℃，30～60s）。
PDX封固劑以上述三個步驟為一個循環(huán)，每一循環(huán)的產(chǎn)物均可作為下一個循環(huán)的模板，經(jīng)過n次循環(huán)后，目的DNA以2n的形式增加。
三、樣品準(zhǔn)備
1、模板制備
客戶提供PCR所需模板（質(zhì)粒、基因組DNA、PCR產(chǎn)物等），或者提供樣品，我們制備模板。
2、引物設(shè)計
PDX封固劑客戶提供上、下游引物，或者提供目的基因的相關(guān)信息（基因序列、Genebank accession number擴增產(chǎn)物的用途等），我公司提供免費的引物設(shè)計及合成。XY90603隨機引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒5次(A)XY90604PCR法DNA探針標(biāo)記試劑盒5次(A)XY90605TdT加尾法DNA探針標(biāo)記試劑盒5次(A)XY131036DNA 5’末端標(biāo)記試劑盒10次XY100210dNTP溶液(標(biāo)記專用)0.5mLXY100920生物素標(biāo)記dUTP溶液50μLXY100921地高辛標(biāo)記dUTP溶液25μLXY120631Aminoally-dUTP溶液100μLXY120630Fluorescein -12- dUTP溶液25μLXY130995Cy3-dCTP溶液25μLXY130996Cy5-dCTP溶液25μLXY121122柱式探針純化試劑盒10次XY121110超快核酸轉(zhuǎn)膜試劑盒5次(A)|5次(B)XY70104核酸印跡膜染液100mLXY80915超級雜交液100mL(A)|100mL(B)XY130904超級雜交液(Oligo探針)10mLXY130905超級雜交液(芯片)10mLXY130906超級雜交液(原位雜交)10mLXY131208DNA探針變性液10mLXY100405SSC溶液，20×100mLXY100809SSPE溶液，20×100mLXY70907去離子甲酰胺100mLXY100812BLOTTO溶液100mLXY70904酵母tRNA溶液1.5mL(A)|1.5mL(B)XY91104Denhardt溶液，50×100mL(A)|100mL(B)XY100604鮭魚精DNA溶液1mLXY130908鯡魚精DNA溶液1mLXY131207小牛胸腺DNA溶液1mLXY130810熒光尺1個XY120643硫酸葡聚糖1gXY120644聚乙二醇100gXY120674酪蛋白50gXY130907脫脂奶粉(雜交專用)50gXY120676Southern封堵液(NC專用)50mLXY120677Southern封堵液(Nylon專用)50mLXY100930硝酸纖維素膜1張(A)|1張(B)XY120930分子雜交爐1臺XY120931紫外交聯(lián)儀1臺XY121114非同位素探針雜交試劑盒5次(A)|5次(B)XY100847BCIP-NBT法地高辛雜交檢測試劑盒5次XY100848ECL法地高辛雜交檢測試劑盒5次XY131001AP標(biāo)記的抗地高辛抗體10μLXY131002AP標(biāo)記的抗生物素抗體10μLXY131003HRP標(biāo)記的抗地高辛抗體10μLXY131004HRP標(biāo)記的抗生物素抗體10μLXY130807顯影定影試劑盒1套XY130808顯影粉1袋XY130809定影粉1袋XY131117DNA 包被溶液100mLXY1311654× 核酸液相雜交液10mLXY121206DNA 稀釋液10mL 細(xì)胞及**學(xué)