Paraffin技術(shù)服務(wù)
一、實驗原理
類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制。首先待擴(kuò)增DNA模板加熱變性解鏈，隨之將反應(yīng)混合物冷卻至某一溫度，這一溫度可使引物與它的靶序列發(fā)生退火，再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。Paraffin這種熱變性-復(fù)性-延伸的過程就是一個PCR循環(huán)，PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。
二、實驗步驟
PCR擴(kuò)增
Paraffin根據(jù)客戶的實驗?zāi)康?，進(jìn)行PCR反應(yīng)的優(yōu)化。
1、變性：高溫使雙鏈DNA解離形成單鏈（94℃，30s）。
2、退火：低溫下，引物與模板DNA互補區(qū)結(jié)合（55℃，30s）。
3、延伸：中溫延伸。DNA聚合酶催化以引物為起始點的DNA鏈延伸反應(yīng)（70～72℃，30～60s）。
Paraffin以上述三個步驟為一個循環(huán)，每一循環(huán)的產(chǎn)物均可作為下一個循環(huán)的模板，經(jīng)過n次循環(huán)后，目的DNA以2n的形式增加。
三、樣品準(zhǔn)備
1、模板制備
客戶提供PCR所需模板（質(zhì)粒、基因組DNA、PCR產(chǎn)物等），或者提供樣品，我們制備模板。
2、引物設(shè)計
Paraffin客戶提供上、下游引物，或者提供目的基因的相關(guān)信息（基因序列、Genebank accession number擴(kuò)增產(chǎn)物的用途等），我公司提供免費的引物設(shè)計及合成。XY51206Taq DNA聚合酶500U|5000UXY120401熱啟動Taq DNA聚合酶100UXY130606抗干擾Taq DNA 聚合酶100次XY130910Long-Taq DNA聚合酶500UXY90501Tth DNA聚合酶250UXY51207Pfu DNA聚合酶100UXY130429Phusion DNA聚合酶250UXY101002KOD DNA聚合酶250UXY131037Tfl DNA聚合酶100UXY130430E.coli DNA聚合酶 Ι500UXY100937φ29 DNA聚合酶250UXY120411T4 DNA 聚合酶50UXY130618T7 DNA 聚合酶(未修飾)300UXY130602Vent DNA 聚合酶100UXY131195Deep Vent DNA 聚合酶100UXY131182Sulfolobus DNA 聚合酶 IV100UXY130612Bst DNA 聚合酶，全長500UXY100209Bst DNA聚合酶，大片段800UXY130616Bsu DNA 聚合酶，大片段200UXY1306139°Nm DNA聚合酶200UXY130614Therminator DNA 聚合酶200UXY131196Therminator II DNA 聚合酶100UXY130617Therminator γ DNA 聚合酶200UXY60905MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶10000U|50000UXY131209MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶(H-)1000UXY131210耐熱型MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶(H-)1000UXY90502AMV逆轉(zhuǎn)錄酶200UXY120312末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶500UXY120509Poly(A)聚合酶20UXY130620Poly(U)聚合酶60UXY131124多核苷酸磷酸化酶100mgXY120307SP6 RNA聚合酶1000U|5000UXY120310T7 RNA聚合酶1000U|25000UXY120309T3 RNA聚合酶1000U|10000UXY130641T4 核酸內(nèi)切酶 V2000UXY130643烷基腺嘌呤DNA糖基化酶500UXY1306458-氧代鳥嘌呤DNA糖基化酶80UXY130646尿嘧啶-DNA糖基化酶500UXY130647尿嘧啶糖基化酶抑制劑200UXY130648Afu 尿嘧啶-DNA 糖基化酶200UXY130666尿嘧啶切刻酶50UXY130649人單鏈選擇性單功能尿嘧啶-DNA糖基化酶500UXY120505Dam 甲基轉(zhuǎn)移酶500UXY120511CpG 甲基轉(zhuǎn)移酶(M.SssI)100UXY130653GpC 甲基轉(zhuǎn)移酶 (M.CviPI)200UXY120506T4聚核苷酸激酶200UXY130655熱敏磷酸酶500UXY130552堿性磷酸酶，偶聯(lián)級500UXY131125辣根過氧化物酶，偶聯(lián)級100mgXY120405堿性磷酸酶，大腸桿菌25UXY120404堿性磷酸酶，牛小腸500UXY120403蝦堿性磷酸酶300UXY130657無機(jī)焦磷酸酶，熱穩(wěn)定250UXY130658無機(jī)焦磷酸酶 (酵母)10UXY130659三磷酸腺苷雙磷酸酶10000milliUXY130660ATP硫酸化酶10UXY120419大腸桿菌DNA連接酶1000UXY60609T4 DNA連接酶200UXY130621Taq DNA 連接酶1000UXY1306249°N DNA 連接酶2500UXY120421T4 RNA連接酶1000UXY130622T4 RNA連接酶 11000UXY130855T4 RNA 連接酶 2 (雙鏈RNA連接酶 )150UXY130856T4 RNA 連接酶 2(截短型 )2000UXY130857T4 RNA 連接酶 2 (截短型 K227Q)2000UXY120510ATP依賴的Dnase200UXY131230DNase I干粉100mgXY130984DNase I溶液1.5mLXY90205RNase A干粉100mg|500mgXY3160RNase A溶液1.5mLXY120409BAL 31核酸酶50UXY101001Benzonase核酸酶500UXY130824冷啟動核酸酶10000UXY120407S1核酸酶5000UXY120408綠豆核酸酶1000UXY120412微球菌核酸酶5000UXY120413核糖核酸酶H600UXY130675核糖核酸酶HII250UXY130637Tma 核酸內(nèi)切酶 III500UXY130638核酸內(nèi)切酶 IV1000UXY131228Tth 核酸內(nèi)切酶 IV500UXY130640核酸內(nèi)切酶 V250UXY130639核酸內(nèi)