Benzene(苯)技術(shù)服務(wù)
一、實(shí)驗(yàn)原理
類(lèi)似于DNA的體內(nèi)復(fù)制。首先待擴(kuò)增DNA模板加熱變性解鏈,隨之將反應(yīng)混合物冷卻至某一溫度,這一溫度可使引物與它的靶序列發(fā)生退火,再將溫度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。Benzene(苯)這種熱變性-復(fù)性-延伸的過(guò)程就是一個(gè)PCR循環(huán),PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
PCR擴(kuò)增
Benzene(苯)根據(jù)客戶(hù)的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,進(jìn)行PCR反應(yīng)的優(yōu)化。
1、變性:高溫使雙鏈DNA解離形成單鏈(94℃,30s)。
2、退火:低溫下,引物與模板DNA互補(bǔ)區(qū)結(jié)合(55℃,30s)。
3、延伸:中溫延伸。DNA聚合酶催化以引物為起始點(diǎn)的DNA鏈延伸反應(yīng)(70~72℃,30~60s)。
Benzene(苯)以上述三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán),每一循環(huán)的產(chǎn)物均可作為下一個(gè)循環(huán)的模板,經(jīng)過(guò)n次循環(huán)后,目的DNA以2n的形式增加。
三、樣品準(zhǔn)備
1、模板制備
客戶(hù)提供PCR所需模板(質(zhì)粒、基因組DNA、PCR產(chǎn)物等),或者提供樣品,我們制備模板。
2、引物設(shè)計(jì)
Benzene(苯)客戶(hù)提供上、下游引物,或者提供目的基因的相關(guān)信息(基因序列、Genebank accession number擴(kuò)增產(chǎn)物的用途等),我公司提供免費(fèi)的引物設(shè)計(jì)及合成。XY1001 細(xì)胞核蛋白/漿蛋白抽提試劑盒 50次 XY1101 通用蛋白裂解/抽提試劑 50ml/100ml XY1201 RIPA裂解液 50ml/100ml XY2401 UltraECL底物化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒 50ml(A液B液各25ml)/100ml(A液B液各50ml)/500ml(A液B液各250ml) XY2501 堿性磷酸酶底物顯色試劑盒(BCIP/NBT) 100ml XY0101 GenFectinTM基因轉(zhuǎn)染試劑 0.5ml(可做250次6孔板或者35mm平皿轉(zhuǎn)染)/1ml(可做250次6孔板或者35mm平皿轉(zhuǎn)染) RNA純化 XY3060 非凍型組織RNA保存液 100mL|250mL XY111202 非凍型血液RNA保存液 10mL|100mL XY80601 非凍型**RNA保存液 100mL|250mL XY91103 非凍型拭子病毒保存液 100mL XY110810 病毒沉淀劑 100mL XY101118 水樣病毒沉淀劑 10次 XY3070 動(dòng)物RNAOUT 100mL|250mL XY71201 柱式動(dòng)物RNAOUT 50次|250次 XY80901 大提柱式動(dòng)物RNAOUT 5次 XY3071 血液RNAOUT 50次|250次 XY71202 柱式血液RNAOUT 50次