柱式血液RNAout
柱式血液RNAout低于1.7,考慮RNA降解,*常見的原因是RNA酶去除不徹底。
建議你1.EP管和tip用DEPC水泡,如果來不及也可以買現(xiàn)成的。
2.提取時注意低溫,防止RNA降解。
3.洗滌用的75%酒精用DEPC水配制,*后融解RNA的水也應是DEPC水,或去RNA酶水。
4.提取的RNA盡快轉(zhuǎn)錄成cDNA,-70度保存時間不宜過長(一般不超過一個月)。
柱式血液RNAout提RNA提取秘訣:
1.提取RNA過程應該盡量快,不要太過仔細,以減少RNA的降解
2.在吸取上清液時要小心,離心管盡量不要抖動和傾斜,保持其從離心機里拿出來的角度吸取,加入異丙醇的那一步要尤其小心,上清液不要貪多
3.柱式血液RNAout干燥時不要太過
4.你跑的電泳是不是普通的瓊脂糖凝膠電泳?這個結果不是很準確,因為在跑膠的過程當中RNA也會降解,但并不一定你提取的RNA效果不好,一般情況下跑出來的電泳結果有3條帶,2000bp,1000bp,100多的位置各有一條帶,分別是28s,18s,5s,如果5S很亮,表示RNA降解
5.提完的RNA可以做反轉(zhuǎn)錄,柱式血液RNAout然后用管家基因檢測,只要能擴出明亮的條帶即對你的實驗沒有影響。注意:在用管家基因檢測時應增加循環(huán)數(shù),以檢測是否有DNA污染。
PAGE上樣液1mLXY100912長效期SDS-PAGE電泳液(干粉)20L(A)XY81205一站式Tricine-SDS-PAGE套裝30次XY81225Tricine-SDS-PAGE配膠液250mL|1000mLXY81213Tricine-SDS-PAGE上樣液1mL|5mLXY81214Tricine-SDS-PAGE陽極電泳液(干粉)10L|50LXY81226Tricine-SDS-PAGE陰極電泳液(干粉)10L|50LXY81212一站式蛋白非變性PAGE套裝30次(A)|30次(B)|30次(C)XY100828高pH緩沖液套裝30次XY100829中pH緩沖液套裝30次XY100830低pH緩沖液套裝30次XY70102蛋白質(zhì)電泳分子量標準15次(A)|20次(B)|10次(C)XY70704預染蛋白質(zhì)電泳分子量標準10次(A)|10次(B)XY90402蛋白膠微量回收試劑盒50次XY90403蛋白膠中量回收試劑盒5次XY80812考馬斯亮藍染液250mLXY61204一步式PAGE染液10次XY111203綠如藍蛋白染液250次XY100810超快蛋白銀染試劑盒1000mLXY100811質(zhì)譜兼容型蛋白銀染試劑盒10次XY100603銀染**劑30次XY81215一站式Western印跡套裝(顯色法)20次(A)|20次(B)XY131104Western 封堵液500mLXY131105酪蛋白封堵液100mL(A)|100mL(B)XY131236牛血清白蛋白封堵液250mLXY131109Tris 緩沖鹽溶液(TBS)10包XY131112氯萘酚溶液50mLXY131114ABTS 溶液50mlXY131115OPD 干粉25gXY131116pNPP 干粉1gXY131108ONPG 干粉1gXY101122尼龍膜1張XY101123PVDF膜1張XY81206氨基黑染膜液250mLXY100924麗春紅S染膜液250mLXY100928濕法電轉(zhuǎn)液(干粉)20LXY81207半干法電轉(zhuǎn)液(干粉)20LXY100878Western印跡膜封膜液100mLXY81208印跡膜抗體稀釋液100mLXY80813Western印跡膜抗體**劑50mL|200mLXY1008315-溴-4-氯-3-吲哚磷酸100mgXY100832四氮唑藍250mgXY81224BCIP/NBT顯色試劑盒100mLXY100214預混型BCIP/NBT溶液100mLXY81223增強型DAB顯色試劑盒100mLXY101106沉淀型TMB顯色試劑盒100mLXY91101一管式 TMB 顯色液100mL(A)XY120201超敏化學發(fā)光(HRP)檢測試劑盒25mL|250mLXY131192超敏化學發(fā)光(AP)檢測試劑盒25mLXY131142魯米諾1gXY131143AMPPD100mgXY131118乙烯乙二醇200mLXY131119HRP 穩(wěn)定劑/ 稀釋劑200mLXY130565β-Actin小鼠單抗30μLXY130566α-Actin小鼠單抗30μLXY130567β-Tubulin小鼠單抗30μLXY130568α-Tubulin小鼠單抗30μLXY130569GAPDH小鼠單抗30μLXY130570植物Actin小鼠單抗30μLXY130571組蛋白3.1小鼠單抗30μLXY130572COX IV兔單抗20μLXY131144山羊抗小鼠IgG(H+L),堿性磷酸酶標記100μLXY131145山羊抗兔IgG(Fc),堿性磷酸酶標記100μLXY131146山羊抗人IgG(H+L),堿性磷酸酶標記100μLXY131147山羊抗大鼠IgG(H+L),堿性磷酸酶標記100μLXY131148驢抗山羊IgG,堿性磷酸酶標記60μLXY131149山羊抗兔IgG(H+L),辣根過氧化物酶標記300μLXY131150山羊抗小鼠IgG(H+L),辣根過氧化物酶標記300μLXY131151山羊抗人IgG(H+L),辣根過氧化物酶標記300μLXY131152兔抗雞IgY,辣根過氧化物酶標記300μLXY131153驢抗山羊IgG,辣根過氧化物酶標記60μLXY131154山羊抗小鼠IgG,熒光素488標記0.1mgXY131155山羊抗小鼠IgG,熒光素555標記0.1mgXY131156山羊抗兔IgG,異硫氰酸熒光素標記0.1mgXY131157藻紅蛋白標記山羊抗兔IgG0.1mgXY131158熒光素488標記山羊抗兔IgG0.1mgXY131159熒光素555標記山羊抗兔IgG0.1mgXY131160異硫氰酸熒光素標記山羊抗小鼠IgG0.1mgXY131161山羊抗小鼠IgG,藻紅蛋白標記0.1mgXY100841β-巰基乙醇1.5mLXY100881SDS溶液(10%,電泳級)100mLXY90311電泳級Tricine干粉100gXY111007MALDI蛋白樣品處理試劑盒500次