臺(tái)盼藍(lán)染色液配制

臺(tái)盼藍(lán)又稱臺(tái)盼蘭、錐蟲藍(lán)、曲利苯藍(lán)，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性。還常用于檢測(cè)細(xì)胞是否存活。臺(tái)盼藍(lán)可被巨噬細(xì)胞吞噬，故可用于巨噬細(xì)胞的活體染色劑。

臺(tái)盼藍(lán)染色液的原理

細(xì)胞損傷或死亡時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA 結(jié)合，使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。嚴(yán)格來說，臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)的是細(xì)胞膜的完整性， 通常認(rèn)為細(xì)胞膜喪失完整性，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。這被稱為染料排除測(cè)試。通過顯微鏡很容易就能識(shí)別出死亡的被臺(tái)盼藍(lán)染色的細(xì)胞，并可使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。

4％臺(tái)盼藍(lán)母液配制

1.稱取4克臺(tái)盼藍(lán)，

2.加入少量蒸餾水研磨，

3.加0.9%NaCl至100毫升，

4.用濾紙過濾，4℃保存。或者直接用0.9%的生理鹽水或者PBS配成母液用的時(shí)候用生理鹽水或者PBS稀釋。

臺(tái)盼藍(lán)染色法操作步驟：（僅供參考）

材料：

1. 顯微鏡、玻片、蓋玻片、滴管；

2. 試劑：0.4%臺(tái)盼藍(lán)染液；

3. 臺(tái)盼藍(lán)（Trypan blue）：0.4g；

4. 生理鹽水：100ml；

步驟：

1. 用Hanks液配制0.1%臺(tái)盼藍(lán)溶液；

2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液來消化培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞；

3. 再加入適量Hanks液制成細(xì)胞懸液；

4. 將待染色細(xì)胞稀釋至所需濃度（方法及濃度范圍與細(xì)胞計(jì)數(shù)相同）；

5. 每0.1ml細(xì)胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴，室溫下染3—5min；

6. 染色過的細(xì)胞材料，取一滴細(xì)胞懸液置玻片上，加蓋玻片后放高倍鏡下觀察；

7. 死亡的細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大，無光澤?；罴?xì)胞不著色并保持正常形態(tài)，有光澤；

8. 計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目；

9. 統(tǒng)計(jì)未染色細(xì)胞?？砂垂接?jì)算出細(xì)胞活率。

細(xì)胞活率（%）=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×100。