**篩選三步法：高效分析**篩選測定

**篩選是確定**效用必不可少的一步，要知道****或抗體**偶聯(lián)物篩選測定是確立**候選物在殺死癌細(xì)胞中的效用的**步。然而，整個過程的**篩選測定是耗時和繁瑣的。這篇文章的目的是使體外篩選測定更容易。

簡單來說，**篩選可被分解為3步。

**步：細(xì)胞培養(yǎng)（plate 1）

. 仔細(xì)選擇目標(biāo)細(xì)胞，來測試化合物的功效。通常，選擇癌細(xì)胞系（組織特異性腫瘤類，耐藥/敏感性癌癥）用于**篩選。

. 使用96孔板，覆蓋廣泛的濃度范圍。

. 在200μl培養(yǎng)基/孔中保持鋪板密度為5000-20,000個細(xì)胞。密度將取決于細(xì)胞生長和孵育時間（24,48或72小時）。準(zhǔn)備大量的細(xì)胞稀釋液。

. 一個96孔板可以測定兩類**（**1：行A-D，列2-12；**2：行E-H，列2-12）中的兩種**的測試。陰性對照（A-D行，第1列），陽性對照（E-H行，第1列）對照。如圖1所示。

. 使用**刺激前，孵育過夜。

圖1：plate 1 分布圖（來自Arpita Kulshrestha）

**步：**稀釋 (plate 2)

. 這一步需要計(jì)算。你需要決定化合物的測試范圍。這通?；谂c化合物的**效率/毒性范圍相關(guān)的先前報(bào)道。如果你是**個測試者，簡單地測試3個濃度范圍（如100μM，10μM和1μM）。

. 一旦你知道原始濃度范圍，決定目標(biāo)細(xì)胞能承受的*高濃度。將該濃度乘以2，即是工作濃度（例如，如果10μM是實(shí)驗(yàn)的*高濃度，10X2 = 20μM是工作濃度）。 如圖2所示。

. 在96孔板中，從該工作濃度起進(jìn)行2倍連續(xù)稀釋。多通道移液器是這一步的必備神器！

圖2：plate 2 分布圖（來自Arpita Kulshrestha）

第三步：**與細(xì)胞融合

. 棄掉Plate 1的整個培養(yǎng)基。使用多通道移液槍，將95ul新鮮培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到Plate 1的每個孔中。然后，將95ul上述**稀釋物從Plate 2轉(zhuǎn)移到Plate 1相同（對應(yīng)）的孔中。這時的陰性對照為：A1，B1，C1，D1；陽性（無**）對照為：E1，F(xiàn)1，G1，H1。孵育細(xì)胞。

. 一旦孵育完成，使用任何細(xì)胞活力/細(xì)胞毒性分析來測試候選**。