產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
|
產(chǎn)品名稱
|
恙蟲病東方體探針法熒光定量PCR試劑盒
|
|
規(guī)格
|
50次
|
|
貨號
|
FS-01P98827
|
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
產(chǎn)品組成:
|
成分
|
規(guī)格
|
|
溶液A
|
13ml
|
|
溶液B
|
13ml
|
|
溶液C
|
18ml
|
|
離心吸附柱
|
50套
|
|
通用洗柱液
|
50ml
|
|
DNA洗脫液
|
10ml
|
|
說明書
|
1份
|
使用方法:
一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細(xì)胞預(yù)處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預(yù)處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取
5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。
13. 重復(fù)上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
體外非細(xì)胞系統(tǒng)硫代水楊酸
細(xì)胞血紅素氧合酶（HEME OXYGENASE）活性熒光定量檢測試劑盒20次銥海棉
組織血紅素氧合酶（HEME OXYGENASE）活性熒光定量檢測試劑盒20次氧化鑭
細(xì)胞醛縮酶（ADOLASE）活性比色法定量檢測試劑盒20次貝母素乙
組織醛縮酶（ADOLASE）活性比色法定量檢測試劑盒20次防己諾林堿（漢防己乙素
細(xì)胞多聚ADP核糖聚合酶－1（PARP-1）活性比色法定量檢測試劑盒20次濱蒿內(nèi)酯
組織多聚ADP核糖聚合酶－1（PARP-1）活性比色法定量檢測試劑盒20次漢黃芩素
細(xì)胞異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒20次辛夷脂素
組織異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒20次珍珠（皺紋冠蚌）
尿酶活性比色法定量檢測試劑盒20次杏葉防風(fēng)
細(xì)胞乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次苯
組織乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次氫氯噻嗪
血液乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次奧美拉唑
細(xì)胞乙醛脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次鹽酸非那吡啶
組織乙醛脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次二甲氧芐啶
恙蟲病東方體探針法熒光定量PCR試劑盒phospho-PKC delta (Tyr311) 磷酸化蛋白激酶C亞性D型抗體四乙基米氏酮 99%
PLAU/uPA 尿激酶型纖溶酶原激活因子抗體米氏酮 98%
PLAUR 尿激酶型纖溶酶原激活因子受體抗體N-甲基二乙 98%
PLG 纖維蛋白溶酶原抗體N-甲基二乙 99%
Plexin A1 神經(jīng)叢蛋白A1抗體2-(甲氨基)乙 99%
Plexin A2 神經(jīng)叢蛋白A2抗體2，2'-硫代雙乙 99%
Plexin B1 神經(jīng)叢蛋白B1抗體 CP,97.0% （劇品）
Plectin 網(wǎng)蛋白抗體 AR,99.0%（劇品）
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責(zé)申明：以上內(nèi)容為注冊會員自行發(fā)布，若信息的真實(shí)性、合法性存在爭議，平臺將會監(jiān)督協(xié)助處理，歡迎舉報