產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^(guò)程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來(lái)被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過(guò)8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見(jiàn)白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時(shí)避開(kāi)漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來(lái)洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
人纖維蛋白原標(biāo)準(zhǔn)溶液鋁鎳合金

人體液微量白蛋白（microalbumin）比濁法定量檢測(cè)試劑盒20次人腫瘤壞死因子β（TNF-β）ELISA試劑盒,TNF-β ELISA kit

人微量白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液人凋亡相關(guān)因子配體（FASL）ELISA試劑盒,FASL ELISA kit

人血液脂蛋白A（lipoprotein A）比濁法定量檢測(cè)試劑盒20次人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽（PACAP）ELISA試劑盒,PACAP ELISA kit

人脂蛋白A標(biāo)準(zhǔn)溶液人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TFR/CD71）ELISA試劑盒,TFR/CD71 ELISA kit

血小板相關(guān)性抗體（PA IgG）細(xì)胞流式儀檢測(cè)試劑盒10次人Ⅲ型膠原（ColⅢ）ELISA試劑盒,Col Ⅲ ELISA kit

酶聯(lián)檢測(cè)（EIA）分析試劑專題人NOGO-A抗體（Nogo-A Ab）ELISA試劑盒,Nogo-A Ab ELISA kit

名稱規(guī)格人抗腦組織抗體（ABAb）ELISA試劑盒, ABAb ELISA kit

人腦血液補(bǔ)體蛋白C3比濁法定量檢測(cè)試劑盒20次人破傷風(fēng)抗體（Tetanus Ab）ELISA試劑盒,Tetanus Ab ELISA

人補(bǔ)體蛋白C3標(biāo)準(zhǔn)溶液人谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSH-Px）ELISA試劑盒, GSH-Px ELISA

人血液補(bǔ)體蛋白C4比濁法定量檢測(cè)試劑盒20次人骨鈣素/骨谷氨酸蛋白（OT/BGP）ELISA試劑盒,OT/BGP ELISA

人補(bǔ)體蛋白C4標(biāo)準(zhǔn)溶液人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員3（EAR3）ELISA試劑盒,

人血液C－反應(yīng)蛋白（C-RP）比濁法定量檢測(cè)試劑盒20次人二氫嘧啶酶樣3（DPYSL3）ELISA試劑盒,

通用細(xì)胞/組織載玻片制備試劑盒20次人胸苷酸合成酶（TS）ELISA試劑盒,

細(xì)胞/組織多聚賴氨酸載玻片制備試劑盒5次人鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶（OCT）ELISA試劑盒,
細(xì)小病毒B19探針?lè)晒舛縋CR試劑盒MTNR1B  褪黑素受體1B抗體2,4-二甲基-1- 99%

MLN  胃動(dòng)素抗體3,4-二 99%

mTOR  雷帕霉素靶蛋白抗體4-硝基鄰二甲苯 99%

Phospho-mTOR (Ser2448)  磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體3-硝基鄰二甲苯 99%

Phospho-mTOR (Ser2481)  磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體草酸高鐵銨 98%

MTLR  胃動(dòng)素受體抗體硫酸亞鐵銨，六水 AR，99.5%

CA15-3/Muc1/CD227  粘蛋白-1/上皮膜抗原抗體硫酸高鐵銨,十二水 AR，99.0%

Muc2  粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗體乙基纖維素 電子級(jí)

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