產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線(xiàn)粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€(xiàn)粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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洋蔥伯克氏菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
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規(guī)格
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50次
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貨號(hào)
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FS-01P98720
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操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
產(chǎn)品組成:
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成分
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規(guī)格
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溶液A
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13ml
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溶液B
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13ml
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溶液C
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18ml
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離心吸附柱
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50套
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通用洗柱液
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50ml
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DNA洗脫液
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10ml
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說(shuō)明書(shū)
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1份
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使用方法:
一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細(xì)胞預(yù)處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^(guò)程中形成的冰晶會(huì)將線(xiàn)粒體刺破,使其DNA釋放出來(lái)被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預(yù)處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動(dòng)物線(xiàn)粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取
5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過(guò)8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見(jiàn)白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時(shí)避開(kāi)漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。
13. 重復(fù)上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來(lái)洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線(xiàn)粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專(zhuān)一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：
基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）明膠酶譜法（zymography）5次二甲酚橙四鈉
電泳分析試劑盒苯甲酸
蛋白電泳染色試劑專(zhuān)題二十七烷
名稱(chēng)規(guī)格人黑色素（MSH）ELISA試劑盒,MSH ELISA kit
通用型蛋白電泳考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒10次人抗網(wǎng)硬蛋白抗體（ARA）ELISA試劑盒, ARA ELISA kit
麥黃酮蛋白電泳考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒10次人抗天然脫氧核糖核酸抗體（n-DNA-Ab）ELISA試劑盒,n-DNA-Ab ELISA
蛋白電泳硝酸銀染色試劑盒10次人抗核小體抗體IgG（AnuA-IgG）ELISA試劑盒,AnuA-IgG ELISA KIT
蛋白電泳尼羅紅染色試劑盒20次人沙眼衣原體抗體（CT）ELISA試劑盒,CT ELISA
蛋白電泳SYPRO橙色染色試劑盒10次人戊型肝炎病IgM（HEV-IgM）ELISA試劑盒,HEV-IgM ELISA
蛋白電泳伊紅黃色染色試劑盒10次人丙型肝炎IgG（HCV-IgG）ELISA試劑盒,HCV-IgG ELISA
蛋白電泳固綠染色試劑盒10次人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）ELISA試劑盒,GPC-3 ELISA
蛋白電泳麗春紅染色試劑盒10次人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白（CETP）ELISA試劑盒,CETP ELISA 96T/48T
銅蛋白電泳染色試劑盒10次人色素C（Cyt-C）ELISA試劑盒,Cyt-C ELISA
蛋白雜交試劑專(zhuān)題人吡哆醛/吡哆醇維生素B6激酶（PDXK）ELISA試劑盒,PDXK ELISA
名稱(chēng)規(guī)格人尿激酶（UK）ELISA試劑盒,
洋蔥伯克氏菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒IL-17 白介素-17抗體（人）氫氧化鋇，八水 ACS, 98%
IL-17R/IL-17RA/CD217 白介素17受體抗體鎂 AR,99.5%
IL-17RC/IL-17RL 白介素17受體C抗體2,2-偶氮二異丁 98%
IL-17RD 白介素17受體D抗體對(duì)溴苯甲 99%
IL-17B 白介素-17B抗體對(duì)溴苯乙 98%
IL-17RB 白介素-17B受體抗體碳酸鋇 ACS
IL-17C 白介素-17C抗體二氧化錳 AR,85%
IL-17D/IL-27 白介素-17D抗體二氧化錳 GR,91%
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