實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞
形態(tài)特性：成纖維細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：L-M(TK-)CA-lls(ATCCCCL-1.3)用Wnt-3A表達(dá)載體轉(zhuǎn)染并在含G418的培養(yǎng)基中篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株。Wnt-3A基因編碼一個(gè)有變異的信號(hào)功效分泌性糖蛋白。Wnt基因控制胚胎發(fā)過(guò)程中的許多模式形成和生長(zhǎng)事件。這些細(xì)胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。它們是目前**Wnt-3A條件培養(yǎng)基的好來(lái)源。由于這種條件培養(yǎng)基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對(duì)于涉及Wnt-3A條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)有必要用其來(lái)源細(xì)胞株(ATCCCRL-2648)作對(duì)照。

培養(yǎng)條件：DMEM（高糖）+10%FBS

傳代方法： 1:4~1:10傳代；2~3天換液1次。

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
高爾基體蛋白A4(GOLGA4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：GOLGA4 ELISA Kit，英文縮寫：GOLGA4，產(chǎn)品別名：高爾基體蛋白A4(GOLGA4)ELISA檢測(cè)試劑盒，高爾基體蛋白A4(GOLGA4)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

蓋膜蛋白β(TECTβ)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：TECTβ ELISA Kit，英文縮寫：TECTβ，產(chǎn)品別名：蓋膜蛋白β(TECTβ)ELISA檢測(cè)試劑盒，蓋膜蛋白β(TECTβ)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

肝腎骨堿性磷酸酶(ALPL)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ALPL ELISA Kit，英文縮寫：ALPL，產(chǎn)品別名：肝腎骨堿性磷酸酶(ALPL)ELISA檢測(cè)試劑盒，肝腎骨堿性磷酸酶(ALPL)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

鈣蛋白酶12(CAPN12)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CAPN12 ELISA Kit，英文縮寫：CAPN12，產(chǎn)品別名：鈣蛋白酶12(CAPN12)ELISA檢測(cè)試劑盒，鈣蛋白酶12(CAPN12)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SCG2 ELISA Kit，英文縮寫：SCG2，產(chǎn)品別名：分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)ELISA檢測(cè)試劑盒，分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

防御素β132(DEFβ132)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DEFβ132 ELISA Kit，英文縮寫：DEFβ132，產(chǎn)品別名：防御素β132(DEFβ132)ELISA檢測(cè)試劑盒，防御素β132(DEFβ132)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

泛素特異性肽酶8(USP8)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：USP8 ELISA Kit，英文縮寫：USP8，產(chǎn)品別名：泛素特異性肽酶8(USP8)ELISA檢測(cè)試劑盒，泛素特異性肽酶8(USP8)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

二氫硫辛酸轉(zhuǎn)乙?；?/span>(DLAT)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DLAT ELISA Kit，英文縮寫：DLAT，產(chǎn)品別名：二氫硫辛酸轉(zhuǎn)乙?；?DLAT)ELISA檢測(cè)試劑盒，二氫硫辛酸轉(zhuǎn)乙酰基酶(DLAT)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

多配體蛋白聚糖3(SDC3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SDC3 ELISA Kit，英文縮寫：SDC3，產(chǎn)品別名：多配體蛋白聚糖3(SDC3)ELISA檢測(cè)試劑盒，多配體蛋白聚糖3(SDC3)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

動(dòng)力蛋白激活蛋白1(DCTN1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DCTN1 ELISA Kit，英文縮寫：DCTN1，產(chǎn)品別名：動(dòng)力蛋白激活蛋白1(DCTN1)ELISA檢測(cè)試劑盒，動(dòng)力蛋白激活蛋白1(DCTN1)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

蛋白聚糖3(PRG3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PRG3 ELISA Kit，英文縮寫：PRG3，產(chǎn)品別名：蛋白聚糖3(PRG3)ELISA檢測(cè)試劑盒，蛋白聚糖3(PRG3)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。
LWnt3A細(xì)胞PCDH11Y  原鈣粘附蛋白11Y抗體規(guī)格 0.2ml

PCDH11X  原鈣粘附蛋白11X抗體規(guī)格 0.2ml

PCDH1  原鈣粘附蛋白1抗體規(guī)格 0.2ml

PCB  丙酮酸羧化酶抗體規(guī)格 0.2ml

PCANAP2/Prostein  前列腺癌相關(guān)蛋白2抗體規(guī)格 0.2ml

P-cadherin  P-鈣粘附分子抗體規(guī)格 0.1ml

PBR/DBI/TSPO  外周苯二氮受體抗體規(guī)格 0.1ml
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。