實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：正常乳腺細(xì)胞；MDA-kb2
生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：L15+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
羅丹明123 99%Anti-Desmin/FITC  熒光素標(biāo)記結(jié)蛋白抗體IgG雞芳硫酯酶B(ASB)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

草二乙酯 AR，99%Anti-DHAV/FITC  鴨型肝炎A病抗體IgG雞胰蛋白酶原II(Try2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

草二乙酯 CP，98%Anti-DIO2/FITC  熒光素標(biāo)記脫酶2抗體IgG雞膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

草二乙酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.7% (GC)Anti-DISC1(CT)/FITC  熒光素標(biāo)記DISC1 C端抗體IgG雞視黃誘導(dǎo)因/RIG-1樣受體(RLR)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

化烯鈀(II)二聚物 Pd 58.2%Anti-DISC1(NT)/FITC  熒光素標(biāo)記DISC1 N端抗體IgG雞調(diào)節(jié)正常T表達(dá)和因子(RANTES)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

(1R,2S)-1-氨-2-茚 98%Anti-DJ-1/FITC  熒光素標(biāo)記絲裂原依賴性癌因蛋白抗體IgG雞雄誘導(dǎo)蛋白1(AIG1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

(+)-2,2'-亞雙[(3aR,8aS)-3a,8a-二氫-8H-茚[1,2-d]并惡唑 Anti-DKK1/FITC  熒光素標(biāo)記抑癌蛋白DKK1抗體IgG雞胃脂酶 (LIPF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

(1S,2R)-(-)-1-氨-2-茚  99%Anti-DKK3/FITC  熒光素標(biāo)記抑癌蛋白DKK3抗體IgG雞半凝集素7(GAL7)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

(1,5-環(huán)辛二烯)2,4-戊二酮銠(I) 99%Anti-KMT6/EZH2/FITC  熒光素標(biāo)記抑癌蛋白EZH2抗體IgG雞畸胎瘤衍生生長因子1(TDGF1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

乙酰酮(降二烯)合銠 97%Anti-DLK1/FITC  熒光素標(biāo)記穿膜蛋白DLK1抗體IgG雞蛋白激酶C-ζ(PKCζ)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

乙酰酮酰雙(亞乙)化銠 99%Anti-DLX4/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗DLX4抗體IgG雞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

二羰乙酰酮銠 99%Anti-DMBT1 /FITC  熒光素標(biāo)記抑癌因抗體IgG雞核孔蛋白205kda(NUP205)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

三膦醋鈀 Pd 14.2%Anti-DMT1/FITC  熒光素標(biāo)記金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1抗體IgG雞蛋白酶(PP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1,4-雙(二膦丁烷)二化鈀 98%Anti-Dnmt1/FITC  熒光素標(biāo)記DNA轉(zhuǎn)移酶1抗體IgG雞胰島素自身抗體(IAA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

雙(乙)化鈀(II)  Pd 41.0%Anti-Dnmt3a/FITC  熒光素標(biāo)記DNA轉(zhuǎn)移酶-3α抗體IgG雞轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(TNPO2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
MDA-kb2細(xì)胞布魯東氏酪氨激酶Elisa試劑盒端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗原IFNAR1  干擾素α受體抗體

銅鋅超氧化物歧化酶Elisa試劑盒TRIM32抗原IFN-Alpha/IFNA1/IFNA13/Interferon alpha 1  干擾素α抗體

L-天冬氨氧化酶Elisa試劑盒原肌球蛋白抗原IFN-Alpha 2b/Interferon alpha 2/INFA2  干擾素α2b抗體

交替氧化酶Elisa試劑盒生精凋亡相關(guān)因4抗原IFNA4/IFNA76/IFNA M1  干擾素α4抗體

脫氫酶Elisa試劑盒CIDEB抗原IFNA21/IFNA F  干擾素α21抗體

V型ATP酶Elisa試劑盒Tsg101抗原IFNA17/Interferon alpha 17/IFNA88  干擾素α17抗體

脫氧核糖核酶Elisa試劑盒促狀腺素受體抗原IFNA16/Interferon alpha 16  干擾素α16抗體

透明質(zhì)酶Elisa試劑盒自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗原IFNA11/Limitin/Interferon alpha 11  干擾素α11抗體

固氮酶Elisa試劑盒肺癌腫瘤阻抑因1抗原IFNA10/Interferon alpha10/Interferon alpha C  干擾素α10抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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