冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：乳腺腺癌細(xì)胞；MDA-MB-415
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：這株細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因。8168088].帶瘤患者來(lái)自巴拉圭，雖然填報(bào)的是白人，但細(xì)胞表型存在G6PDＡ型，顯示其屬于混血。細(xì)胞株形成平展延伸的上皮細(xì)胞樣，在電鏡下呈現(xiàn)結(jié)節(jié)，伴隨著延伸的微管和微板。不容易用胰酶消化。

L15:LeibovitzMedium10%FBS

傳代方法：消化5-10分鐘。1:2。4-5天長(zhǎng)滿。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

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相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

硝鐿 99.99% metals basisAnti-Phospho-Cofilin (Ser3) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化絲切蛋白抗體IgG雞空泡素相關(guān)蛋白A(VacA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

硝氧鋯 水合物 AR,99.5%Anti-Cortactin/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠皮層肌動(dòng)蛋白抗體IgG雞泛素激活酶樣蛋白(UBE1L)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

溴硝 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-Cortactin (phospho Tyr466) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化皮層肌動(dòng)蛋白抗體IgG雞肌-3-激酶(PI3K)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

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2-乙 98%Anti-Glycodelin A/PP14/FITC  熒光素標(biāo)記胎盤(pán)蛋白14抗體IgG雞泛素結(jié)合酶E2C(UBE2C)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

正丁鋰正己烷溶液 1.6M 己烷溶液（15%溶液）Anti-Clusterin- Alpha/ Beta /FITC  熒光素標(biāo)記凝聚素α/β抗體IgG雞質(zhì)金屬蛋白酶24(MMP-24)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

正丁鋰 2.7M 己烷溶液（25%溶液）Anti-C-Myc/HRP (MYC/MTLC)  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記致癌因C-Myc抗體IgG雞巨噬集落激因子受體(MCSFR)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

正丁鋰正己烷溶液 2.2M 己烷溶液（20%溶液）Anti-C-Mer/MERTK /FITC  熒光素標(biāo)記c-mer原癌因酪氨激酶抗體IgG雞激活素A(ACVA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

溴素 ACSAnti-C-Met/HGFR /FITC  熒光素標(biāo)記肝生長(zhǎng)因子受體(原癌因蛋白)抗體IgG雞肌漿球蛋白(MYO)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

正丁鋰 2.5M 己烷溶液Anti-C-Met/HGFR/HRP   辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記肝生長(zhǎng)因子受體(原癌因蛋白)抗體IgG雞前列腺素E受體2(EP2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

硫銫 AR,99.5%Anti-SMMHC/MYH11/FITC  熒光素標(biāo)記平滑肌肌球蛋白重鏈抗體IgG雞白介素1β(IL-1β)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

硫銫 99.9%Anti-SM-MHC/FITC  熒光素標(biāo)記心肌肌凝蛋白抗體IgG雞血管緊張素II受體2(ANGⅡR2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

化銫 ARAnti-CMKLR1/CHEMR23/FITC  熒光素標(biāo)記趨化樣因子受體1抗體IgG雞微管蛋白α3C(TUBα3C)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋰 99%Anti-C-Myc/MYC/MTLC /FITC  熒光素標(biāo)記C-Myc致癌因抗體IgG雞間皮素(MSLN)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氟化鋰  AR,99%Anti-c-Myc tag/FITC  熒光素標(biāo)記c-Myc tag標(biāo)簽抗體IgG雞集落激因子2受體β (CSF2Rβ)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
MDA-MB-415細(xì)胞葡萄糖脫氫酶Elisa試劑盒尿激酶型纖溶酶原激活因子（多肽）IL-3(human)  白介素3抗體（人）

鈣調(diào)蛋白Elisa試劑盒平足蛋白抗原IL-3  白介素3抗體

谷氨酰合成酶2Elisa試劑盒多囊腎蛋白1抗原IL-2R gamma/CD132  白介素2受體γ鏈抗體

內(nèi)肽酶Elisa試劑盒多囊腎蛋白2抗體IL-29/IFNL1  白介素29抗體

α-L阿拉伯呋喃糖苷酶Elisa試劑盒化蛋白激酶B抗原（絲氨化位點(diǎn)：473）IL-28B/IL-28C  白介素28B抗體

β半糖苷酶Elisa試劑盒Raf激酶抑制蛋白抗原IL-28A/IFNL2  白介素28A抗體

胰蛋白酶Elisa試劑盒乙肝病pre-X蛋白抗原（N端）IL-27R/TCCR  白介素27受體抗體

胰蛋白酶抑制劑Elisa試劑盒乙肝病pre-X蛋白抗原（C端）IL-26/AK155  白介素26抗體

水解酶Elisa試劑盒脯氨羥化酶(多肽)IL-23R  白介素-23受體抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。