實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

形態(tài)特性：母細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

特征特性：該細(xì)胞系來(lái)源于一典型的人B細(xì)胞白血病病人。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
1,6-二溴己烷 97%LF/LTF (Rabbit Lactoferrin) ELISA Kit  兔鐵傳遞蛋白/鐵蛋白豚鼠生長(zhǎng)分化因子9(GDF9)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

內(nèi)消旋-2,3-二巰丁二 98%c (Rabbit cardiac isoform of Tropnin T) ELISA Kit  兔心肌特異性肌鈣蛋白T豚鼠凝血因子ⅩⅢ(F13)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1,3-二烷 98%LZM (Rabbit Lysozyme) ELISA Kit  兔溶酶豚鼠半胱氨酰白三烯受體1(CYSLTR1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

異辛硫 97%PRL (Rabbit prolactin) ELISA Kit  兔子催素豚鼠甘露糖苷酶α1A類成員1(MAN1A1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3,4-乙烯二氧噻吩 99%LH (Rabbit luteotropic hormone) ELISA Kit  兔子促黃體豚鼠活化蛋白C(APC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

溴乙乙酯 98%ABAb (Rabbit anti-brain tissue antibody) ELISA Kit  兔抗腦組織抗體豚鼠血小板球蛋白β(βTG/PBP/CXCL7/NAP2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1,2-乙二硫 97%p53 (Rabbit p53/tumor protein) ELISA Kit  兔p53豚鼠絲氨/蘇氨激酶39(STK39)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

溴代異辛烷 99%BAX (Rabbit Bcl-2 Assaciated X protein) ELISA Kit  兔Bcl-2相關(guān)X蛋白豚鼠肌激酶(CK)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

薄荷酰 98%ADR (Rabbit adramycin) ELISA Kit  兔阿霉素豚鼠前列腺素F(PGF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1-己硫 96%MMP-2/Gelatinase A (Rabbit matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A) ELISA Kit  兔質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A豚鼠二氧化酶(DAO)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

正庚硫 98%OSM (Rabbit Oncostatin-M) ELISA Kit  兔抑瘤素M豚鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/KDR)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1,6-己二硫 97%ANG-2 (Rabbit Angiopoietin 2) ELISA Kit  兔血管**素2豚鼠凝血因子Ⅱ(F2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3--1-丁硫 97%ANG- II (Rabbit angiotension II ) ELISA Kit  兔血管緊張素Ⅱ豚鼠蛋白聚糖4(PRG4)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

異丁硫 98%sFAS/Apo-1 (Rabbit soluble Factor-related Apoptosis) ELISA Kit  兔可溶性凋亡相關(guān)因子豚鼠抗脂抗體(APA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

溴乙酯 97%6-keto-PGF1a (Rabbit 6-keto-prostaglandin F1a) ELISA Kit  兔6酮前列腺素F1a豚鼠核糖體蛋白L10(RPL10)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
BALL-1細(xì)胞查爾酮合成酶Elisa試劑盒c-erbB-2受體抗原LOX-1/OLR1  凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體

鈣依賴蛋白激酶Elisa試劑盒c-erbB-4癌因抗原LONP1  線粒體離子肽酶1抗體

脂肪去飽和酶Elisa試劑盒囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子抗原l-Myc  Myc因肺癌相關(guān)蛋白抗體

葉綠素Elisa試劑盒CG6856-PA抗原LMW Kininogen/Kininogen 1  低分子量生長(zhǎng)促進(jìn)因子抗體（激肽原1）

β-類胡蘿卜素Elisa試劑盒嗜鉻粒素A抗原LMP7  低分子量蛋白酶體7抗體

葉黃素Elisa試劑盒嗜鉻粒素B抗原LMP7  低分子量蛋白7抗體

δ氨乙酰脫水酶Elisa試劑盒蕈堿型乙酰膽堿受體M1抗原LMP2A  EB病LMP-2A蛋白抗體

膽色素原脫氨酶Elisa試劑盒蕈堿型乙酰膽堿受體M3抗原LMP2  低分子質(zhì)量蛋白2抗體

糞卟啉原氧化酶Elisa試劑盒角蛋白18(多肽)LMO4  腫瘤自身抗原LMO4抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。