冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：
形態(tài)特性：母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

特征特性：Raji細(xì)胞由PulvertaftRJV于1963年從一位11歲黑人男孩的左上頜骨的Burkitt瘤中分離建立的，是**個(gè)人類造血系統(tǒng)的連續(xù)傳代細(xì)胞，為B細(xì)胞起源。該細(xì)胞中含有EBV，需要在二級(jí)生物**柜中操作；可作轉(zhuǎn)染宿主。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：維持細(xì)胞濃度在4×105/ml~3×106/ml；根據(jù)細(xì)胞濃度每2~3天補(bǔ)液1次。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

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相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

異辛烷中7種有機(jī)農(nóng)藥混和溶液 體：異辛烷Amylin(Mouse Amylin) ELISA Kit  小鼠胰淀素豚鼠雌受體α(ERα)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

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三溴標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.93mg/ml，體：T3(Mouse Tri-iodothyronine)ELISA Kit  小鼠狀腺原氨豚鼠著絲粒蛋白A(CENPA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2，4，6-三酚標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/ml，體:C5a(Mouse Complement fragment 5a)ELISA Kit  小鼠補(bǔ)體片斷5a豚鼠表睪酮(ET)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

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鎢標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml17-OHP(Mouse 17-Hydroxyprogesterone)ELISA Kit  小鼠17羥孕酮豚鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子2-mRNA結(jié)合蛋白3(IGF2BP3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

三唑酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.8%FS(Mouse Follistatin)ELISA Kit  小鼠卵泡抑素豚鼠黑素瘤抑制性活性蛋白1(MIA1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  
RAJI細(xì)胞精Elisa試劑盒活化T表達(dá)和的調(diào)節(jié)因子抗原LZTS1  假定腫瘤抑制亮氨拉鏈蛋白1抗體

亞精Elisa試劑盒巨噬炎性蛋白1β抗原LZTFL1  亮氨拉鏈轉(zhuǎn)錄因子樣1抗體

腐Elisa試劑盒巨噬炎性蛋白3α抗原LYVE-1  管內(nèi)皮透明質(zhì)受體抗體

精(束縛態(tài))Elisa試劑盒單核趨化蛋白5抗原Lysozyme  溶酶抗體

亞精(束縛態(tài))Elisa試劑盒嗜粒趨化蛋白14抗原Lyn  膜相關(guān)蛋白酪氨激酶Lyn抗體

腐(束縛態(tài))Elisa試劑盒嗜粒趨化蛋白22抗原LYL1  性白血病相關(guān)序列1抗體

精(結(jié)合態(tài))Elisa試劑盒巨噬炎性蛋白19抗原LYK5  蛋白激酶LYK5抗體

亞精(結(jié)合態(tài))Elisa試劑盒嗜粒趨化蛋白3抗原LY-96/MD-2  MD-2蛋白抗體

腐(結(jié)合態(tài))Elisa試劑盒表面趨化因子受體1抗原LY-86/MD-1  MD-1蛋白抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。