公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

產(chǎn)品名稱：低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞；MHCC97-L
形態(tài)特性：上皮樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：來(lái)源于中山醫(yī)院，生長(zhǎng)較緩慢

培養(yǎng)條件：DMEM/F12+10%FBS

傳代方法：1：2傳代
實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)； 

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 

鎢 94%CT-1 ELISA Kit  大鼠心肌營(yíng)養(yǎng)素1兔XC趨化因子受體1(XCR1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

4-戊炔-1- 97%Alpha-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit  大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA兔微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

五氟酚 99%Lp- Alpha ELISA Kit  大鼠脂蛋白α兔α肌動(dòng)蛋白(α Actin)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

吡啶-2，5-二羧 98%F VIII -Ag ELISA Kit  大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原兔催產(chǎn)素受體(OTR)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

酯 99%FIX ELISA Kit  大鼠凝血因子IX兔胰島素樣蛋白3(INSL3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1--1-丁炔 99%F X ELISA Kit  大鼠凝血因子Ⅹ兔胰腺再生蛋白3γ(REG3γ)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

1--1-炔 99%VWF ELISA Kit  大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子兔GTP酶活化蛋白(GAP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

2--2- 97%PAP ELISA Kit  大鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物兔鈣非依賴性脂酶A2(iPLA2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2-(氨)吡啶 99%TAT ELISA Kit  大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物兔成纖維生長(zhǎng)因子4(FGF4)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氧化鐠(III) 99.9% metals basisATR ELISA Kit  大鼠抗凝血酶受體兔組織蛋白酶D(CTSD)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

鉬 AR,98.0 %TR ELISA Kit  大鼠凝血酶受體兔天門冬氨氨轉(zhuǎn)移酶(AST)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鉬 99.9%cTn- I ELISA Kit  大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ兔晚期糖化終末產(chǎn)物受體(AGER)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

乙酯 99%PI3K ELISA Kit  大鼠肌3激酶兔生長(zhǎng)分化因子6(GDF6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

非那西汀 ≥98.0% (HPLC)PKB ELISA Kit  大鼠蛋白激酶B兔纖維蛋白原β(FGβ)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

雙(硅烷)氨 0.7M in toluene(15%溶液)sIgA ELISA Kit  大鼠型球蛋白A兔II型膠原交聯(lián)羧端肽(CTX-II)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
MHCC97-L細(xì)胞趨化因子配體27Elisa試劑盒Cy5.5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG

3-溴酪氨Elisa試劑盒Cy7標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體Mouse Anti-rabbit IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG

間變性瘤激酶Elisa試劑盒Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgG

球蛋白抗體Elisa試劑盒Cy5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體Mouse Anti-rabbit IgG/PE  PE標(biāo)記的小鼠抗兔IgG

氨肽酶NElisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔IgG

內(nèi)皮微粒水平Elisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgG

神經(jīng)酰酶Elisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗兔IgG

前腦鈉素Elisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgG

緊密連接蛋白2Elisa試劑盒Mouse Anti-rabbit IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgG