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產(chǎn)品名稱：肺腺癌細(xì)胞；NCI-H441
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：NCI-H441建系于1982年（A.F.Gazdar，etal.)。該細(xì)胞分離自一名肺腺癌患者的心包液。該細(xì)胞能在半固體瓊脂糖中形成克隆，并能表達(dá)肺泡表面活性蛋白A。該細(xì)胞在有血清培養(yǎng)基中倍增時間為58小時，在無血清培養(yǎng)基中倍增時間為99-138小時。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：1:3傳代,2-3天傳一代
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

酮 90%HSF1 ELISA Kit  大鼠熱休克因子1兔白介素18(IL-18)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氫醌-О，О'-二乙 98%BetaOHB ELISA Kit  大鼠β羥丁兔性神經(jīng)鞘脂酶(ASM)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

組 96%CYP450 ELISA Kit  大鼠色素P450兔防御素α5(DEFα5)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-己噻吩 98%GHRP-Ghrelin ELISA Kit   大鼠生長釋放肽ghrelin兔激肽釋放酶8(KLK8)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

反-3-己烯-1- 97%vaspin ELASA Kit  大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨蛋白酶抑制劑兔黑素瘤衍生亮氨拉鏈額外核因子(MLZE)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

碳化鉿 99.5%，Zr <1% ，325目BrdU ELISA Kit   大鼠溴脫氧核苷尿嘧啶兔C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員E(CLEC4E)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

乙內(nèi)酰脲-5-乙 98%TGF Beta2 ELISA Kit  大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2兔黃體**素釋放(LHRH/GnRH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

4-(2-羥乙)吡啶 98%CYP2E1 ISA Kit   大鼠色素P4502E1兔核轉(zhuǎn)錄因子Y亞γ(NFYC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

3-羥乙炔 97%Alpha1-MG ELISA Kit  大鼠α1微球蛋白兔CD163分子(CD163)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-羥-4,6-二氧乙酮 98%MCP-4/CCL13 ELISA Kit   大鼠單核趨化蛋白4兔促有絲分裂因子(MF/MPF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-羥-2-(三氟) 94%PPAR- Alpha ELISA Kit  大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α兔心肌肌鈣蛋白T(c/TNNT2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

反式-2-羥肉桂 97%CAM ELISA Kit   大鼠鈣調(diào)素兔肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SPC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-羥-5-氧 98%Apo-E ELISA Kit  大鼠載脂蛋白E兔C4結(jié)合蛋白α(C4BPα)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2-羥-6-煙 98%omentin ELISA Kit  大鼠網(wǎng)膜素兔D-脫氫酶(D-LDH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

3-己炔-2-酮 97%OFQ/N ELISA Kit  大鼠孤腓肽兔脫氫表雄酮硫酯(DHEA-S)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 
NCI-H441細(xì)胞人型卷曲相關(guān)蛋白5Elisa試劑盒PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗豬IgGMT-ND1  NADH復(fù)合體1抗體

凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白8Elisa試劑盒堿性酶（AP）標(biāo)記的兔抗豬IgGMTMR8  肌管素相關(guān)蛋白8抗體

乙?；哌w移族蛋白Elisa試劑盒FITC標(biāo)記的兔抗豬IgGMTMR14  肌管素相關(guān)蛋白14抗體

尾肢同源蛋白2Elisa試劑盒羅丹明標(biāo)記的兔抗豬IgGMTM1/Myotubularin  肌微管素1抗體

胃生長素Elisa試劑盒Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗豬IgGMTLR  胃動素受體抗體

CD69分子Elisa試劑盒Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗豬IgGMTLC  致癌因抗體

血管加壓素Elisa試劑盒Cy5.5標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgGMTHFR  亞四氫葉還原酶MTHFR抗體

簇集蛋白Elisa試劑盒Cy7標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgGMTGR1  髓易位因相關(guān)蛋白1抗體

組織因子途徑抑制物1Elisa試劑盒羅丹明標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgGMTFR1  線粒體裂變調(diào)節(jié)蛋白1抗體