實驗外包-HE染色流程
一 取材和固定
取材后經(jīng)固定24小時（4%PA灌注取材的后固定6~8小時）以后，流水沖洗24小時，置于70%~80%乙醇中，可長期保存。
二 脫水和包埋
1、95%ALC（二道） Ⅰ 2~4h
Ⅱ 2h
2、無水ALC（二道） Ⅰ 1.5h
Ⅱ 1h
3、二甲苯+無水乙醇（1：1） 20min
4、二甲苯（二道） Ⅰ 10min
（注：脫水透明esp.透明時間可適當延長） Ⅱ 10min
5、浸軟蠟（50~52℃）（二道） Ⅰ 30min
Ⅱ 1h
6、浸硬蠟（58~60℃）（二道） Ⅰ 30min
Ⅱ 30min
7、包埋：注意溫度、切面。
三 切片
修、切、展、貼、烤（烤片55~60℃） 3~10h
四 HE染色
1、二甲苯脫蠟 五道，每道5~10分鐘
2、無水乙醇 Ⅰ 5min
Ⅱ 5min
3、95%乙醇 Ⅰ 5min
Ⅱ 5mn
4、80%乙醇 5min
5、70%乙醇 5min
6、D．W． 3~5min
7、Harris蘇木素液 5min（冬天可適當延長，eg.20min）
8、水洗
9、0.5%鹽酸酒精分色 3~10seconds，鏡下觀察
10、水洗藍化 15~30min（注意換水）
11、70%乙醇 5min
12、80%乙醇 5min
13、伊紅液（95%乙醇溶液） 3~30seconds
14、95%乙醇 Ⅰ 1min
Ⅱ 5min
15、無水乙醇 Ⅰ 5min
Ⅱ 5min
16、二甲苯+乙醇（1：1） 5min
17、二甲苯 Ⅰ 5min
Ⅱ 5min
Ⅲ 5min
18、中性樹膠封片。
HE染色注意事項：
1. HE染色時調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2. 切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵，應(yīng)在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導(dǎo)致染色太淺，應(yīng)重新染色后再行分色。
3. 切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹底，應(yīng)將切片退回無水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。
4. 在HE染色過程中不要讓切片干燥，以免切片收縮、變形，影響神經(jīng)元形態(tài)。
5. 切片從二甲苯取出或進入二甲苯前，切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。
6. *后封固時，要用中性樹脂，防止日后褪色，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將???褪色，所用樹脂濃度要適當，樹脂封固時不能有氣泡。
蘇木精—伊紅染色法簡稱HE染色法，它是*常用的普通染色方法。蘇木精（hematoxylin）是陽離子染料，將細胞核內(nèi)的嗜堿性物質(zhì)染成藍紫色。伊紅（eosin）是陰離子染料，將細胞質(zhì)和膠原纖維等染成粉紅色。
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