實(shí)驗(yàn)外包-HE染色石蠟切片制作的基本過程
1、HE染色取材與固定
從人或動(dòng)物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過0．5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10％福爾馬林，Bouin氏固定液等)使組織、細(xì)胞的蛋白質(zhì)變性凝固，以防止細(xì)胞死后的自溶或**的分解，從而保持細(xì)胞本來(lái)的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
2、HE染色脫水透明
一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑，逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精，又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明，以二甲苯替換出組織塊的中酒精，才能浸蠟包埋。
3、HE染色浸蠟包埋
將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保溫。待石蠟完全浸入組織塊后進(jìn)行包埋：先制備好容器(如折疊一小紙盒)，倒入已溶化的石蠟，迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬，才能在切片機(jī)上切成很薄的切片。
4、HE染色切片與貼片
將包埋好的蠟塊固定于切片機(jī)上，切成薄片，一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折，要放到加熱的水中燙平，再貼到載玻片上，放45℃恒溫箱中烘干。
5、HE染色脫蠟染色
常用HE染色，以增加組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)各部分的色彩差異，利于觀察。蘇木精(Hematoxylin，H)是一種堿性染料，可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色，被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿性。伊紅(Eosin，E)是一種酸性染料，能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色，被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸性。染色前，須用二甲苯脫去切片中的石蠟，再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精，*后入蒸餾水，就可染色。
HE染色過程是：
①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。
?、谒崴鞍彼蟹稚鲾?shù)秒鐘。
?、哿魉疀_洗1小時(shí)后入蒸餾水片刻。
?、苋?0％和90％酒精中脫水各10分鐘。
?、萑刖凭良t染色液染色2～3分鐘。
6、脫水透明
染色后的切片經(jīng)純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明。
7、封固
將已透明的切片滴上加拿大樹膠，蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后，貼上標(biāo)箋，切片標(biāo)本就可使用。
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