第六、培養(yǎng)基在使用過程中應(yīng)注意的問題： 
（1） 培養(yǎng)基在使用前需37 oC預(yù)熱或在室溫平衡后再使用。 
（2） 細(xì)胞培養(yǎng)過程中，吸取過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，防止殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)基焦化，將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液中。 
（3） 盡量縮短各種液體、細(xì)胞的暴露時間。 
（4） 避免液體間、細(xì)胞間的交叉污染。 
（5） 配制完全培養(yǎng)基時，配制的量*好在2周內(nèi)用完為好。
 
第七、血清的有關(guān)問題： 
新生牛血清：新出生牛5天內(nèi)取血制成 
小牛血清：小牛出生16周以內(nèi)采血制成。 
胎牛血清：（進(jìn)口血清）要求剖腹取胎制成。 
國內(nèi)廠家往往不能做到，經(jīng)常把出生2天以內(nèi)采血稱為胎牛血清。 
根據(jù)血清的生產(chǎn)工藝及血紅蛋白、內(nèi)**含量又分為： 
（1）.特級胎牛血清：40納米過濾，內(nèi)**含量≤10EU， 血紅蛋白含量≤10mg/dl。 
（2）.優(yōu)等胎牛血清：經(jīng)過3次100納米過濾， 
內(nèi)**含量≤25EU/ml， 
血紅蛋白含量≤25mg/ml。 
（3）.標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清：3次100納米過濾，低內(nèi)**， 低血紅蛋白含量。 
（4）.活性碳/葡聚糖處理血清：**含量大大降低。 
（5）.透析型胎牛血清：次黃嘌呤和胸腺核苷含量大大降低。 

第八、其他細(xì)胞培養(yǎng)用液：除培養(yǎng)基、血清、谷氨酰胺外，其他幾種液體也屬必須，不可省略。 
（1）雙抗：200倍，（1ml/支）其終濃度為青霉素100U/ml；鏈霉素100ug/ml，-24 oC保存。 
（2）L-谷氨酰胺：100倍，（1ml/支）， 終濃度2mM，-24 oC保存。 
（3）丙酮酸鈉：配制濃度50mM，4ml/支，終濃度為1mM/ml， -24 oC保存。 
（4）Hepes液：配制濃度1M（5ml/支），一支Hepes加入到200ml 
完全培養(yǎng)基中，終濃度為25mM/ml，常溫保存。 

第九、支原體污染及檢測： 
（1）支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)中*常見、不易被查覺，但支原體污染可顯著影響細(xì)胞功能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。支原體是介于**和病毒之間的目前所知能獨(dú)立生活的*小微生物，它無細(xì)胞壁，形態(tài)呈高度多形性，*小直徑0.2um，可通過濾器。 
目前通過對國內(nèi)100余株/系細(xì)胞的檢測，形勢不容樂觀。污染率達(dá)30% ~ 60% 。課題組從國外引進(jìn)細(xì)胞株/系也經(jīng)常出現(xiàn)支原體的污染。支原體在污染細(xì)胞后，它通過影響細(xì)胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培養(yǎng)基中的氨基酸來抑制細(xì)胞的生長，并能降低細(xì)胞的融合率。因此，在運(yùn)用各種細(xì)胞系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究時，首先要證明所用細(xì)胞有無支原體的污染。 
（2）支原體污染后，培養(yǎng)基可不發(fā)生渾濁，細(xì)胞病變輕微或不明顯，因此難以發(fā)現(xiàn)。目前，支原體檢測的方法有以下幾種。 
（a）相差顯微鏡觀察；
（b）.低張?zhí)幚淼匾录t染色法； 
（c）熒光染色法；
（d）.酶標(biāo)法； 
（e）PCR法：使用該方法進(jìn)行檢測。 
優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，檢測耗時短，樣品量小 
（只需50ul細(xì)胞培養(yǎng)用液上清）。 
缺點(diǎn)：引物及制劑費(fèi)用較高。