**、培養(yǎng)用液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 

由于，大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。 
但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng)。因此，我們?cè)谂渲婆囵B(yǎng)用液時(shí)，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí)，溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。 

**、液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。 

幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)**而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。 

第三、常用培養(yǎng)基及培養(yǎng)用液的滲透壓范圍 

培養(yǎng)基名稱                滲透壓范圍（mOSM） 
DMEM（高糖）              315 ~ 350 
DMEM（低糖）              270 ~ 330 
RPMI-1640                 260 ~ 290 
MEM-EBSS                  280 ~ 310 
MEM-NEAA                  280 ~ 310 
McCoy5a                   280 ~ 310 
MEM-a                     280 ~ 310 
M—199                    275 ~ 305 
IMDM                      270 ~ 300 
DMEM/F-12                 280 ~ 310 
F—10                     270 ~ 300 
F—12                     275 ~ 300 
培養(yǎng)基名稱                滲透壓范圍（mOSM） 
L—15                     280 ~ 320 
D-Hanks                  280 ~ 300 
Hanks                     280 ~ 300                    
PBS                       275 ~ 300 

第四、液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？ 

要冷藏！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí)，其溶液的pH值會(huì)發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年。 

第五、細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎？ 

不見得！因?yàn)橐鹊鞍酌溉芤旱南芰κ呛腿芤旱?/span>pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力*強(qiáng)。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液濃度為： 
（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ； 
（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。 
（3）0.25% 胰蛋白酶 
溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。 
多數(shù)細(xì)胞傳代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ這種消化液。