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微孵育
微孵育
微孵育成像和記錄室的加熱:儀器應(yīng)用的基本原理。 為什么要加熱? 長(zhǎng)期以來(lái),科研人員早已理解了溫度調(diào)節(jié)在細(xì)胞功能研究中的重要性。例如,在Medline檢索中輸入關(guān)鍵詞“溫度”和“細(xì)胞”,從1995年后可以查到超過(guò)12,000篇相關(guān)文獻(xiàn)。其中,大部分的文獻(xiàn)都著重研究溫度對(duì)細(xì)胞的生物物理和代謝功能的影響。此外,成像系統(tǒng)的光學(xué)性能對(duì)溫度也極其敏感,這是因?yàn)?,隨著物鏡溫度的變化,成像系統(tǒng)的焦平面會(huì)產(chǎn)生偏移,早已有相關(guān)文獻(xiàn)揭示了這一點(diǎn)。因此,對(duì)于在記錄環(huán)境中研究細(xì)胞功能的科研人員來(lái)說(shuō),嚴(yán)格的溫度控制的重要性是不能言過(guò)其實(shí)的。許多的爭(zhēng)議也使科研人員們面臨著如何努力去維持溫度的**控制,包括如何在變化的流速下維持恒定、均一的水浴溫度,以及如何控制周圍環(huán)境的溫度變化。另外,向灌注道中添加溫度低的**或溶液對(duì)系統(tǒng)溫度所產(chǎn)生的影響,以及由于顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)及載物臺(tái)所造成的溫度降低也必須進(jìn)行闡述。
一般問(wèn)題 熱量來(lái)源(source of heat flux)
熱傳遞途徑一般可以分為這么幾種:傳導(dǎo)、對(duì)流和輻射。傳統(tǒng)來(lái)說(shuō),沿著控制途徑傳導(dǎo)的熱量傳遞的效果*顯著,其次是對(duì)流路徑。我們是這么來(lái)定義微孵育熱傳導(dǎo)途徑的:熱量在一連續(xù)的介質(zhì)中進(jìn)行傳遞叫傳導(dǎo),這包括有顯微鏡的載物臺(tái)或物鏡、灌注液、成像和記錄室的平臺(tái)、以及工作環(huán)境的其他物理元件。一般來(lái)講,熱量通過(guò)對(duì)流途徑進(jìn)行傳遞的效果沒(méi)有通過(guò)傳導(dǎo)途徑那么顯著,不過(guò)這也包括了蒸發(fā)或冷凝,以及由于成像室上空氣流動(dòng)所導(dǎo)致的熱量傳遞。與前兩種相比,輻射途徑的熱量傳遞更容易控制,此處就不再考慮了。 不均衡熱傳導(dǎo)中的空間和時(shí)間考慮 我們首先考慮在空間狀況中熱量不均衡分布的根源,這包括有通過(guò)水浴箱或從平臺(tái)至容器熱量交換的少許熱傳導(dǎo)。通過(guò)水浴進(jìn)行的少量熱傳導(dǎo)是由于在水浴液中,不同部位之間存在著溫度梯度。微孵育這種溫度梯度通常是由于將一物體直接浸入到水浴液中標(biāo)本下方所致。通過(guò)這一途徑的熱量傳遞可能非常顯著,結(jié)果可能會(huì)導(dǎo)致在3至5mm內(nèi)產(chǎn)生高至10攝氏度的溫度變化。此外,將施加的熱量只限制于水浴箱的平臺(tái)上,這也會(huì)在水浴中產(chǎn)生溫度梯度,這一點(diǎn)常常不太引起人們的注意。因?yàn)槠脚_(tái)只會(huì)沿著水浴箱的邊緣進(jìn)行加熱,由于在水浴箱中混入了溫度相對(duì)較低的溶液,水浴液的熱容量會(huì)發(fā)生變化,從而導(dǎo)致產(chǎn)生溫度梯度。在將溫度低的灌注液注入至加熱平臺(tái)中時(shí),或者在將不同于當(dāng)前灌注溫度的**或溶液加入到灌注道中時(shí),如果改變加液的速度也可導(dǎo)致產(chǎn)生暫時(shí)的加熱不均。
下文中,將會(huì)更加詳細(xì)的闡述這些微孵育方面的考慮。
除氣作用
另外一個(gè)與灌注液加熱相關(guān)的重要觀點(diǎn)被稱為除氣。在標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下,與液體相接觸的氣體會(huì)溶解到液體中去,并趨向于達(dá)到一個(gè)平衡,這一平衡具體取決于氣體分壓和液體的溫度。通常說(shuō)來(lái),溫度低的液體較溫度高的液體可以溶解更大體積的氣體。因此,在液體的溫度升高的時(shí)候,溶解的氣體便會(huì)自溶液中放出,從而導(dǎo)致出現(xiàn)氣泡。
加熱方法
研究人員在微孵育研究中采用了許多的方法來(lái)調(diào)節(jié)標(biāo)本的溫度,包括使用耐高溫的、有帕耳帖效應(yīng)的或者使用基于液體應(yīng)用的設(shè)備來(lái)加熱水浴箱平臺(tái)、在成像室和/或其他的光學(xué)部件中通過(guò)管道循環(huán)熱空氣、以及調(diào)節(jié)灌注液的溫度。調(diào)節(jié)灌注液溫度的技術(shù)有預(yù)熱灌注液儲(chǔ)液罐和/或在灌注道內(nèi)使用管線內(nèi)溶液加熱器。每種方法都有其優(yōu)點(diǎn)和不足,下文將會(huì)詳細(xì)討論。 如何感應(yīng)溫度 一般而言,通常是通過(guò)一熱敏電阻或相似的設(shè)備來(lái)測(cè)量溫度,并將之反饋至溫度控制器來(lái)調(diào)整加熱元件的功率。在調(diào)節(jié)溫度時(shí),計(jì)算出反饋回路的響應(yīng)時(shí)間很重要,因?yàn)檫@可以導(dǎo)致系統(tǒng)產(chǎn)生振蕩。
微孵育的控制和調(diào)節(jié)
warner器械的微孵育溫度控制器每個(gè)通道都使用了兩個(gè)熱敏電阻來(lái)進(jìn)行溫度監(jiān)測(cè),并可以反饋信息至控制器。一個(gè)熱敏電阻安裝于加熱元件中(比如水浴箱平臺(tái)、管線內(nèi)加熱器等)以測(cè)量加熱塊的溫度。從這一熱敏電阻所得到的信息可被反饋至控制裝置,這樣它便可以為加熱器提供足夠的功率以維持控制器所設(shè)定的溫度。 在研究中,**個(gè)熱敏電阻通常被放置于靠近標(biāo)本的加液通道中,這樣可以測(cè)量標(biāo)本的溫度??蒲腥藛T通過(guò)此熱敏電阻所獲得的信息來(lái)重新調(diào)節(jié)控制器的設(shè)定溫度,并可以此來(lái)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的性能。 這種方法非常有效,它可以為加熱元件提供嚴(yán)格的溫度控制,(±0.1ºC),并且只要反饋回路足夠好,它也可以為灌注液提供**的溫度控制。
warner器械所生產(chǎn)提供的溫度控制器有不同的響應(yīng)時(shí)間常數(shù),因而可以適合不同的操作情況需要,使用者可以據(jù)此自行選擇購(gòu)買(mǎi)所需型號(hào)。 方法學(xué) 管線內(nèi)溶液加熱器 加熱標(biāo)本的*簡(jiǎn)單、*直接的方法是在將灌注液注入水浴箱前,對(duì)灌注液進(jìn)行預(yù)熱。這樣,即使加熱后的灌注液以不同的流速流過(guò)標(biāo)本,也可以維持標(biāo)本溫度均衡。只要灌注液持續(xù)的通過(guò)加熱器流入水浴箱,這種方法就一直有效。 在使用這種方法時(shí),有很多重要的考慮。首先,要縮短加熱器與水浴箱之間的距離,這一點(diǎn)非常重要。如果在流經(jīng)途中丟失的熱量太多的話,操作者可以嘗試將加熱控制器的溫度設(shè)定超過(guò)溶液的沸點(diǎn)。此外,還應(yīng)當(dāng)注意使水流維持于一定的流速,這樣可使溶液在流出加熱器前,溫度達(dá)到平衡。 水浴箱平臺(tái)加熱 另一個(gè)方法是加熱水浴箱平臺(tái),使用一耐高溫的部件通常便可以達(dá)到這一點(diǎn),這一方法被用于Warner水浴箱。對(duì)此方法稍作改進(jìn),使用一有帕耳帖效應(yīng)或基于液體加熱的元件也可用于為平臺(tái)進(jìn)行加熱。不去考慮加熱所使用的具體方式,在溶液流速特別緩慢或根本不流動(dòng)時(shí),這一加熱方法是*適合的微孵育。 在使用這種方法時(shí),有很多重要的考慮。首先,灌注液只有在注入水浴箱后才會(huì)被加熱,這樣就會(huì)在水浴中產(chǎn)生溫度梯度。其次,因?yàn)榧訜岬臒崃恐皇峭ㄟ^(guò)平臺(tái)作用于水浴箱的邊緣,所以熱量傳遞至溶液中去的速度非常緩慢。但是,在溶液根本不流動(dòng)時(shí),比如說(shuō)在用示蹤染料作用于細(xì)胞并需維持于一恒定溫度時(shí),這一方法就要優(yōu)于其他任何方法。 儲(chǔ)液罐加熱 通常并不認(rèn)為加熱儲(chǔ)液罐是一種用來(lái)維持水浴溫度的成功方法,這是因?yàn)?,在流至水浴箱的途中,不是全部就是大部分的熱量將?huì)丟失。不過(guò),如果溶液的排氣是一大問(wèn)題的話,這一技術(shù)就非常重要了。因?yàn)槿芤喝芙獾臍怏w體積取決于其分壓及溫度,那么在將溶液注入*終的加熱器前,事先在大氣壓下預(yù)熱溶液,即使溶液在流動(dòng)途中溫度會(huì)降低,也可以減少在水浴箱中產(chǎn)生氣泡。因此,儲(chǔ)液罐加熱*好和下文所描述的其他加熱技術(shù)一起合用。 顯微鏡載物臺(tái)加熱 在需要的時(shí)候,在成像時(shí)也需將物鏡浸入到液體中,這就為科研人員帶來(lái)一高難度難題,即此時(shí)如何去維持標(biāo)本的溫度。因?yàn)槲镧R是直接接觸溶液或水浴箱的,并且直接置于標(biāo)本上方或下方,這就在系統(tǒng)中引入了一個(gè)有效的熱傳導(dǎo)路徑。 加熱物鏡環(huán)在實(shí)際中是可行的,并且被認(rèn)為可以減少通過(guò)光學(xué)系統(tǒng)的熱量傳遞。但是,許多科研人員指出,在將環(huán)旋下旋上時(shí)的小的溫差可導(dǎo)致焦平面的振動(dòng)偏移。此外,許多科研人員也表示,擔(dān)心在使用中,在兩側(cè)溫度相差很大時(shí),緊旋物鏡對(duì)研究結(jié)果的影響。一些科研人員通過(guò)將物鏡維持于一恒定溫度來(lái)闡明這一觀點(diǎn),即使未使用物鏡。 加熱包裝外殼 目前使用的另一個(gè)加熱方法是將成像室以及顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)裝入可加熱的外殼中。這一方法的先進(jìn)之處在于成像室和物鏡都可維持一恒定、均衡的溫度。通過(guò)將暖空氣引入包裝中,整個(gè)環(huán)境通常都可以被加熱。這一方法的不足之處是其對(duì)于溫度設(shè)定點(diǎn)變化的反應(yīng)較慢、可能會(huì)從鼓風(fēng)系統(tǒng)中引入空氣中的污染物、以及需要用于成像系統(tǒng)之上或其周圍的體積龐大的設(shè)備。 討論 上述討論的每一種加熱方法都有其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),對(duì)于所遇到的加熱問(wèn)題都不是十全十美的解決辦法。但是,通過(guò)聯(lián)合這些方法,可以解決實(shí)驗(yàn)中所遇到的大部分困難。 例如,單獨(dú)使用平臺(tái)加熱并不足以恒定的加熱灌注液,不過(guò)如果因?yàn)槟承┰颍芤毫鲃?dòng)被阻斷了,那么此時(shí)就需進(jìn)行平臺(tái)加熱了。另外,加熱灌注液*有效的方法是通過(guò)一管線內(nèi)加熱器。因此,在需要嚴(yán)格控制溫度的實(shí)驗(yàn)中,并且其溶液流速時(shí)常變化、有可能非常緩慢、或者可能被阻斷時(shí),*佳的加熱方法便是聯(lián)合使用管線內(nèi)和平臺(tái)加熱。 如果溶液經(jīng)過(guò)冷藏并且在達(dá)到操作溫度前就已使用,或者如果在實(shí)驗(yàn)中溫度起了變化,那么此時(shí)標(biāo)本的排氣就是一重要問(wèn)題。微孵育通過(guò)在實(shí)驗(yàn)設(shè)置中包含儲(chǔ)液罐預(yù)熱這一方法便可解決這一問(wèn)題。 不過(guò),儲(chǔ)液罐加熱并不能夠?yàn)樗∠涮峁┘訜岬乃∫海?好聯(lián)合使用管線內(nèi)加熱器。
當(dāng)然,在任何的實(shí)際情況下,都可以將三種加熱方法微孵育聯(lián)合使用,這樣可以提供有效的溫度調(diào)節(jié)。 Warner器械生產(chǎn)提供了高質(zhì)量的單通道和雙通道溫度控制器,以及儲(chǔ)液罐、水浴箱平臺(tái)和管線內(nèi)溶液加熱器。我們真誠(chéng)邀請(qǐng)您撥打我公司的技術(shù)支持專線,我們將熱忱幫助您確定適合您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的*佳的加熱方案。
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