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技術(shù)文章

多肽知識(shí)

◎　多肽的保存 　　多肽在-20℃很穩(wěn)定，特別是冷凍干燥并保存在干燥器中，在將它們暴露于空氣之前， 冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少，當(dāng)無(wú)法冷凍干燥時(shí)，*好的方法是以小的工作樣量存放。 　　對(duì)于含Cys, Met orTrP的多肽，脫氧緩沖劑對(duì)其溶解必不可少，因?yàn)檫@種多肽可易空氣氧化， 在封瓶前，慢慢流過(guò)多肽的氮?dú)饣驓鍤庖矔?huì)降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有這些肽與不含這些有問(wèn)題解苷的那些肽相比，生命期有限。 ◎　多肽的溶解性 　　大多數(shù)肽的優(yōu)選溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對(duì)于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽， 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle來(lái)溶解，這些溶劑可能某些實(shí)驗(yàn)有副作用。所以我們建議設(shè)計(jì)多肽時(shí)要加注意。 　　殘基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。 　　您需要特殊的多肽或任何技術(shù)幫助，請(qǐng)隨時(shí)與我們聯(lián)系。 我們包你完全滿(mǎn)意，對(duì)于我們不能適當(dāng)合成的順序，我們不收費(fèi)。 ◎　多肽的保存和操作 　　包裝 1mg或更少的多肽按凈重包裝，聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水。 例如，氨基酸分析決定的肽含量是80%， 在1mg樣品中，那么瓶中毛重是1.25mg。 　　大量的多肽以毛重算。標(biāo)出的重量含相關(guān)抗離子和水， 例如，25mg樣品中肽百分比為90%，那么，實(shí)際肽量為25mg×90%=22.5mg 　　不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%， 而肽含量相關(guān)帶電基團(tuán)（如Arg, Lys ）的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性。 ◎　凍干肽的保存 　　所有產(chǎn)品應(yīng)存于冰箱， *好為-20℃。多數(shù)肽以此方法可以存放幾年不變。 ◎　肽溶液的保存 　　溶液肽遠(yuǎn)比凍干形式不穩(wěn)定，溶液應(yīng)為中性pH(pH5-7), -20℃保存的，為避免樣品的反復(fù)凍融， *好分成小樣存放。一份樣品融凍后未用完， 應(yīng)扔掉，**降解有時(shí)會(huì)成為溶液肽的麻煩， 為克服此，肽應(yīng)溶于無(wú)菌水， 或肽溶液用0.2μ M濾膜過(guò)濾。 ◎　多肽的重建和操作 　　多數(shù)肽溶于無(wú)菌蒸溜水。初次溶解時(shí)，要注意使初始濃度比要求濃度大，如果多肽僅有限溶解性， 這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽。 　　如果多肽在水中的溶解性有限，有幾種選擇可幫助溶解： 　　對(duì)堿性肽用稀乙酸（含Arg , Lys , His） 　　酸性肽用稀氨水（含Asp, Glu） 　　對(duì)極疏水的肽用10%有機(jī)修飾物（Acetonitnile , Methanol） 　　極不溶的肽用DM50或DMF 　　guanicline hydrochloride或脲的濃溶液也很有用， 與上述方法合用， 聲處理也是溶解多肽的有效手段。 ◎　多肽應(yīng)用和保存 　　多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問(wèn)題是形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。除了*太肽外，這點(diǎn)都會(huì)發(fā)生， 在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會(huì)促進(jìn)二級(jí)結(jié)構(gòu)形成。我們建議先在無(wú)菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率， 可用聲處理。溶解仍有問(wèn)題， 加少量稀乙酸（10%）或氨水，會(huì)便于溶解。 　　要長(zhǎng)期保存多肽， *好冷凍干燥，冷干粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無(wú)降解。溶液中的多肽遠(yuǎn)不穩(wěn)定。 多肽易受**降解，應(yīng)用無(wú)菌純化水溶解。 　　含有Met, Cgs或Try殘基的多肽溶液由于氧化，壽命有限。應(yīng)溶于無(wú)氧溶劑， 為防止重復(fù)凍融的破壞， 建議溶解過(guò)量的肽的便實(shí)驗(yàn)，其余多肽以固體形成保存。 ◎　HPLC分析和純化 　　分析HPLC使用柱子和泵系統(tǒng)，可以經(jīng)受傳遞高壓，這樣可以用極細(xì)的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在幾分鐘內(nèi)高度被分析。 　　HPLC分兩類(lèi)：離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸組成表現(xiàn)出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用，通過(guò)可變PH， 離子強(qiáng)度， 或兩者洗脫出多肽，通常， 先用低離子強(qiáng)度的溶液，以后逐漸加強(qiáng)或一步一步加強(qiáng)，直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個(gè)例子使用強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過(guò)酸性PH中帶正電來(lái)分離。 　　反相HPLC條件與正常層析正相反。多肽通過(guò)疏水作用連到柱上，用降低離子強(qiáng)度洗脫， 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價(jià)吸附到硅上的碳?xì)渫殒湗?gòu)成，這種鏈長(zhǎng)度為G4-G8碳原子。 由于洗脫是一種疏水作用。長(zhǎng)鏈柱比短鏈對(duì)小的， 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而，總體實(shí)踐中， 這兩類(lèi)柱互變無(wú)多少顯著差別，別類(lèi)載體由碳水化合物構(gòu)成， 比如苯基。 　　典型的操作常由兩綬沖劑組成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線(xiàn)型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見(jiàn)分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱，那么大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m) 　　大量各種緩沖劑含許多不同試劑，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨，TFA/TEA，磷酸鈉或鉀，異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑，但要注意一點(diǎn)：硅反相柱料不能長(zhǎng)時(shí)間暴露于高pH，甚至微堿pH， 因?yàn)檫@樣會(huì)破壞柱子。