1、農(nóng)殘儀檢測原理
農(nóng)殘速測儀儀檢測原理是采用酶抑制法，在一定條件下。有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制膽堿酯酶的活性，其抑制率與農(nóng)藥的濃度星正相關(guān)11-21。在正常情況下，酶催化代謝產(chǎn)物水解。其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計在410am處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率的大小可以判斷樣品中是否有高劑量的有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。
2、農(nóng)殘速測方法
2.1試劑配制與保存
2.1.1緩沖液。用量筒量取500mL蒸餾水，先用少量（100一150 mL）的蒸餾水緩緩倒入放有緩沖 劑干粉的量杯中，用玻棒攪拌至完全溶解后將量筒中剩余的蒸餾水倒人量杯中充分?jǐn)嚢瑁〒u勻），待用。
2.1.2顯色劑。用刻度吸管吸5.2 mL緩沖液注入顯色劑瓶中，蓋上蓋搖勻，置于0—5℃環(huán)境中備用，切勿冷凍。
2.1.3底物。用刻度吸管吸5.2 mL蒸餾水注入底物干粉瓶中，蓋上蓋搖勻，置于嘰5 cc環(huán)境中備用。
2.2樣液制備
取干凈的蔬菜，用天平準(zhǔn)確稱取2 g，葉菜取葉片部分，果菜橫截削下一片，葉片、瓜肉等剪成I cm2，置于100 mL小燒杯內(nèi)；用吸管吸10 mL緩沖液注入小燒杯中，振蕩提取2 min左右；提取結(jié)束后靜置2—3 min，取上層清液作為樣液。
2.3農(nóng)殘速測儀儀操作與樣品測定
2.3.1農(nóng)殘速測儀儀預(yù)熱。接通電源，農(nóng)殘速測儀儀自檢，自檢結(jié)束后待機(jī)預(yù)熱10 min.儀器工作穩(wěn)定后進(jìn)行測量13-71。
2.3.2對照測定。向檢測板*左排比色孔中用專用的移液槍分別加10卜L酶試劑，再用250斗L移液槍吸取250斗L緩沖液于比色孔，按上下鍵選擇“啟動振板”菜單后按“確認(rèn)”鍵啟動振板10 S，振板結(jié)束后。讓酶試劑和緩沖液混合液靜置反應(yīng)10 min，用專用的移液槍向比色孔分別加入lO斗L顯色劑和10斗L底物，立即將檢測板放入托盤，按“對照”鍵測量（反應(yīng)時間設(shè)為l min）。測試結(jié)束，按“確認(rèn)”鍵顯示對照吸光度變化值。待空白對照值的吸光度變化值在0.15加。30，才可測定樣品。否則要重新做空白測定。測量結(jié)束后儀器自動保存當(dāng)前的對照值，下一次測量樣品時就可以
2.3.3樣品測定。若已完成各通道的對照測試，將檢測板上所有比色孔作為樣品測量。用不同移液槍分別給比色孔加酶液10“L／孔，加注樣品液250斗【／孔，顯色劑lO斗L／孔。操作步驟同對照測試，*后按”樣品“鍵測量，測試結(jié)束后，顯示當(dāng)前測量的樣品抑制率結(jié)果和吸光度變化值?？筛鶕?jù)需要打印被測樣品抑制率。
2.3.4測試結(jié)果的判定。測定結(jié)果以抑制率表示。根據(jù)GB／T5009.199—2003判定要求，當(dāng)樣品對酶的抑制率≥50％時，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需重復(fù)測2次以上。
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