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凱氏定氮儀法的原理以及測定中的注意要點
凱氏定氮儀法的原理以及測定中的注意要點
       蛋白質(zhì)與細胞結(jié)構(gòu)、酶、**、病毒、**、物質(zhì)轉(zhuǎn)運和遺傳等密切相關(guān)，蛋白質(zhì)的定量測定是生物化學(xué)和其他生物科學(xué)、食品檢驗、臨床檢驗、**診斷和質(zhì)量檢驗中*重要的工作。人每日都需要攝入一定量的蛋白質(zhì)，以供自身的正常運行，蛋白質(zhì)測定方法一般可分為間接方法和直接方法。間接方法是通過測定樣品中蛋白質(zhì)的含氮量進行推算蛋白質(zhì)含量的方法而定氮儀法就是間接測定方法之一。直接方法則是根據(jù)蛋白質(zhì)的物理和化學(xué)性質(zhì)，直接測定蛋白質(zhì)含量的方法。本文簡單的分析一下凱氏定氮儀法。
       凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)分為樣品消化、蒸餾和吸收、滴定3個過程。在催化劑作用下，試樣用濃硫
酸消煮破壞有機物，使其中的蛋白質(zhì)氮及其他有機氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮，然后與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，測出含氮量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)，計算出粗蛋白質(zhì)含量。該法關(guān)鍵環(huán)節(jié)有濃硫酸用量、催化劑選擇、消化時間、氫氧化鈉用量和硼酸吸收液指示劑選擇等。
       樣品在消化時加入濃硫酸的量必須過量，一是脫水作用，將樣品中有機物脫水然后碳化成C;二是氧化作用，濃硫酸和硫酸鉀、硫酸銅一同加熱使溫度達到400℃以上，碳還原硫酸生成SO2，而碳本身被氧化成CO2;三是分解作用，將蛋白質(zhì)分解，SO2還原N生成NH+4，本身被氧化成SO3;四是吸收作用，生成的NH+4與濃硫酸反應(yīng)生成(NH4)2SO4;五是生成的(NH4)2SO4保存在濃硫酸溶液中不至于損失。
       樣品消化過程要加入催化劑，加入硫酸鉀能夠提高分解時溶液的溫度，使溶液沸點由290℃提高到400℃,加入硫酸銅、氧化汞和硒粉則能促進試樣的分解,縮短消化時間。
       樣品消化過程中，消化液經(jīng)過一系列改變*終轉(zhuǎn)變?yōu)榫G色透明狀態(tài)，這種過程是碳化的有機物完全被氧化的變化，但決不表示樣品中的氮素全部轉(zhuǎn)變?yōu)镹H+4。
       蒸餾過程中加入40%氫氧化鈉溶液，用于中和樣品消化后剩余的濃硫酸,并使(NH4)2SO4轉(zhuǎn)化為NH4OH，經(jīng)加熱生成NH3逸出，被硼酸吸收。為使樣品消化液中的(NH4)2SO4全部轉(zhuǎn)化為NH4OH，40%氫氧化鈉溶液必須過量加入，用量不夠會造成測定結(jié)果偏低，用量過多則浪費試劑。
       硼酸吸收液中混合指示劑的組成和配方有數(shù)種，如溴甲酚綠-甲基紅、甲基紅-甲基藍、甲烯藍-甲基紅等，但以0.5%溴甲酚綠乙醇溶液和0.1%甲基紅乙醇溶液混合而成的混合指示劑變色比較敏感。指示劑與硼酸吸收液的比例通常使用1∶100或2∶100。