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柱壓升高
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色譜柱入U(xiǎn)濾片被流動(dòng)相或樣品中顆粒堵住。
樣品組分在濾片上沉淀堵住濾片。
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卸下入口接頭的濾片，使用1：1的硝酸溶液超聲清洗5min，再用水、
甲醇清洗除去水份。
樣品及流動(dòng)相使用0．45µm濾膜除去微量雜質(zhì)。
使用流動(dòng)相作溶劑配制樣品。
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新柱柱效低
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柱外死體積大。
樣品在流動(dòng)相中溶解不好，影響傳質(zhì)過程。
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更換連接管，重新連接色譜柱，降低死體積。
使用合適的流動(dòng)相或使用流動(dòng)相溶解樣品。
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舊色譜柱柱效低，分離不好，柱入口床層塌陷。
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填料被流動(dòng)相溶蝕而流失。
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用同型填料填補(bǔ)柱效可部分恢復(fù)。
對(duì)硅膠質(zhì)填料，流動(dòng)相PH值在2—7范圍內(nèi)，否則可能被溶蝕。
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舊色譜柱柱效低分離不好，有時(shí)出現(xiàn)雙峰。
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入門填料被污染變質(zhì)所致。
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用強(qiáng)溶劑沖洗。
刮除被污染的床層，用同型的填料填補(bǔ)柱效可部分恢復(fù)。
污染嚴(yán)重，則廢棄或重新填裝。
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新柱接到儀器上后，柱頭漏液。
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柱接頭與儀器之間連接管的壓環(huán)變形量不夠。
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用扳手順時(shí)針方向擰緊1／4圈直到不漏液為止。
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新柱接到儀器上后，啟動(dòng)儀器沒有柱壓降。
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柱放置時(shí)間過長柱內(nèi)充裝的液體己揮發(fā)干。
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繼續(xù)開泵，用流動(dòng)相將柱內(nèi)氣體置換掉。
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新柱接到儀器上后，檢測器出口不斷有小氣泡出
現(xiàn)。
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①同上。
② 流動(dòng)相脫氣不徹底特別是MeOH／H20體系由于氫鍵作用很容易出現(xiàn)氣泡。
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①同上。
②配好流動(dòng)相后一定要進(jìn)行脫氣處理。
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新柱接到儀器上后柱壓降不斷增加，甚至超過儀器的耐壓限。
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柱入口濾片被固體顆粒堵塞(或被毒
菌堵塞)。
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更換或清洗柱入口濾片；用0．45µm過濾膜過濾流動(dòng)相除去微小顆粒物。
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進(jìn)樣次數(shù)增加柱壓降逐漸增加。
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①樣品中含有不溶于流動(dòng)相的微小顆粒物。
②樣品在流動(dòng)相中析出微小結(jié)晶。
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①用0．45µm過濾膜過濾樣品。
②推薦使用流動(dòng)相溶解樣品。
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使用—段時(shí)間后，柱效下降，分離不好。
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①柱填料被流動(dòng)相溶解而流失。
②柱填料被樣品雜質(zhì)污染。
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①推薦使用予柱。如柱床層塌陷，用相同型號(hào)填料填補(bǔ)。
②推薦使用保護(hù)柱或用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱除去污染雜質(zhì)。
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柱使用一段時(shí)間后，柱效下降出現(xiàn)雙峰。
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柱入口床層被污染使柱填料變質(zhì)。
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用強(qiáng)溶劑沖洗除去雜質(zhì)。
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柱使用—段時(shí)間后，柱效下降，出現(xiàn)峰拖尾。
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柱入口床層被污染。
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用強(qiáng)溶劑沖洗20-30ml，若效果不明顯應(yīng)廢棄。
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進(jìn)樣量增大與峰面積增加不成正比．即進(jìn)樣量與峰面積不是線性關(guān)系。
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樣品在流動(dòng)相中的溶解度小，只有部分樣品被流動(dòng)相沖如色譜柱中而另一部分則沉積在柱人口端。
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①用流動(dòng)相溶解樣品。
②樣品的濃度不宜太大。
④進(jìn)樣量不宜過大。
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使用緩沖液作流動(dòng)相時(shí)，柱壓降升高很快。
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霉菌生長所致。
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①在流動(dòng)相中加入有毒物質(zhì)或加疊氯化鈉防止霉菌生長。
②實(shí)驗(yàn)結(jié)束后先用純水后用MeOH各沖洗20-30ml后關(guān)機(jī)。
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用5µm顆粒填料柱時(shí)， 以MeOH／H20作流動(dòng)相柱壓較高。
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MeOH與水之間由于氫鍵作用黏度增大。
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可用乙腈／水體系使柱壓降低，分離效率更好。
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長時(shí)間放置的色譜柱，出現(xiàn)雙峰。
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柱床層出現(xiàn)干裂。
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柱放置時(shí)，好使用相應(yīng)的溶劑充填好，防止受大的機(jī)械震動(dòng)，如床層干裂應(yīng)廢棄掉。
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流動(dòng)相洗滌強(qiáng)度由弱漸強(qiáng)時(shí)出現(xiàn)很多雜質(zhì)峰。
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強(qiáng)溶劑將弱溶劑洗不出的雜質(zhì)沖出來。
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不影響柱的性能。
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柱使用一段時(shí)間后保留值逐漸縮短。
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柱中固定相流失所致。
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①更換色譜柱。
②檢查所用的色譜條件是否合適。
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在U V色譜圖中，靠近死時(shí)間處出現(xiàn)負(fù)峰。
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①進(jìn)樣時(shí)壓力波動(dòng)所致。
②樣品溶劑比流動(dòng)相的UV吸收值低。
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①采用閥進(jìn)樣。
②用流動(dòng)相溶解樣品。
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第四篇高效液相色譜常見故障的判定及解決方法
(一)保留時(shí)間變化
1.柱溫變化 柱恒溫，必要時(shí)需配置恒溫箱
2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱
3.緩沖液容量不夠 用>25mmol/L的緩沖液
4.柱污染 每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化 穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相
6.柱快達(dá)到壽命 采用保護(hù)柱
(二)保留時(shí)間縮短
1.流速增加 檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載 降低樣品量
3.鍵合相流失 流動(dòng)相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向
4.流動(dòng)相組成變化 防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加 柱恒溫
(三)保留時(shí)間延長
1.流速下降 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化 用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失 同前(二)3
4.流動(dòng)相組成變化 同前(二)4
5.溫度降低 同前(二)5
(四) 出現(xiàn)肩峰或分叉
1.樣品體積過大 用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于峰的15%
2.樣品溶劑過強(qiáng) 采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
5.進(jìn)樣器損壞 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子
(五)鬼峰
1.進(jìn)樣閥殘余峰 每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物 處理樣品
3.柱未平衡 重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離子對(duì)色譜)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜) 每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相) 通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水
(六) 基線噪聲
1.氣泡(尖銳峰) 流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機(jī)噪聲) 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑
3.檢測器燈連續(xù)噪聲 更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲) 采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)
5.檢測器中有氣泡 流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
(七)峰拖尾
1.柱超載 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾 清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相
3.硅羥基作用 加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品
4.同前(四)4 同前(四)4
5.同前(四)3 同前(四)3
6.死體積或柱外體積過大 連接點(diǎn)降至低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管
7.柱效下降 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱
(八)峰展寬
1.進(jìn)樣體積過大 同(四)1
2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展 進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散
3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)
4.檢測器時(shí)間常數(shù)過大 設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣峰半寬的10%
5.流動(dòng)相粘度過高 增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相
6.檢測池體積過大 用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時(shí)間過長 等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過大 將連接管徑和連接管長度降至小
9.樣品過載 進(jìn)小濃度小體積樣品
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