線粒體蛋白提取試劑盒
上海通善生物科技有限公司，咨詢專線：400-876-8869
產(chǎn)品組成：
規(guī)格 50T 100T
線粒體試劑A 10ml 20ml
線粒體試劑B 10ml 20ml
蛋白裂解液 5ml 10ml
蛋白酶抑制劑混合物 100ul 200ul
注：
● 蛋白裂解液： 含多種有效成分，可以充分釋放線粒體蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。裂解
液中已含磷酸酶抑制劑混合物。
● 蛋白酶抑制劑混合物：包含7種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin
A、Bestatin、E-64、EDTA。
注意：
1、蛋白酶抑制劑混合物避免反復(fù)凍融。
2、如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
儲(chǔ)存條件：
線粒體試劑AB 于2-8℃保存，長(zhǎng)期存放于-20℃保存；
蛋白裂解液室溫保存；
蛋白酶抑制劑-20℃保存。
有效期：
一年。
注意事項(xiàng)：
● 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或**。
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管
底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。
● *好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清
洗并徹底**殘留清潔劑。
● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Toscience線粒體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體
組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締
組織等哺乳動(dòng)物組織中提取線粒體蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。制備的線粒體蛋白不僅純度
高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、
Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、**共沉淀、酶活性測(cè)定等蛋白研究。
本試劑盒提取的蛋白不可用于2D 電泳。如下游實(shí)驗(yàn)需要用于2D 電泳，請(qǐng)使用貨號(hào)
BB-3191 的試劑盒。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2、將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30 分鐘-1 小時(shí)。
3、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包
含7 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。
該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白
酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
試劑盒以外自備試劑和儀器
● 移液器、吸頭 ● 離心機(jī)及離心管
● 渦旋振蕩器 ● 冰箱，冰盒
使用方法：
使用注意事項(xiàng)：
??旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
??實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
??蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
??可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
??*好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒(méi)有Dounce 勻漿器，用普通1ml 玻璃勻漿器勻漿也可。也
可采用超聲破碎的方法，建議功率30w，10s。采用普通勻漿器或超聲破碎，建議鏡檢，保證細(xì)
胞80%以上的破碎率。
??組織樣品每 50-100mg 用剪刀盡可能剪碎后按下面步驟操作。
1. 取 2×107 個(gè)細(xì)胞①，在4℃，500×g 條件下離心2-3 分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，
盡可能吸干，收集細(xì)胞。
2. 用冷 PBS 洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
3. 加入 200μl 冷的試劑 A，置冰上10 分鐘。
4. Dounce 勻漿器勻漿30-40 下，然后在4℃，500×g 條件下離心5 分鐘。
5. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
6. 在 4℃，11000×g 以上條件下離心20 分鐘。
7. 在沉淀中加入 200μl 冷的試劑B，混勻。
8. 在 4℃，11000×g 以上條件下離心20 分鐘。。
9. 棄上清。
10. 在沉淀中加入 80ul-150ul 裂解液和1-2ul 蛋白酶抑制劑混合物，置冰上20 分鐘，
每隔5 分鐘高速渦旋振蕩15 秒。
11. 即得線粒體蛋白。
12. 將上述蛋白提取物定量②后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)③。
注：
① 細(xì)胞數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整，每次的裂解液用量并不是一定的，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。
② 建議用BCA 法進(jìn)行蛋白定量。
③ 蛋白樣品－80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被**污染。