TUNEL
一、材料：原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（美國(guó)ROCHE公司出品）、
DAB檢測(cè)試劑盒
二、操作程序
①石蠟包埋的切片的預(yù)處理常規(guī)脫蠟脫水
②用蛋白酶K（20μg/ml溶于Tris/HCl中，Ph7.4~8.0）室溫孵育15~30分鐘。37度孵育15分鐘。PBS洗2次
③標(biāo)記：PBS沖洗2次，擦干樣品周?chē)乃?，滴?0ul的TUNEL反應(yīng)混合溶液，在濕盒中37℃孵育60分鐘（為防止蒸發(fā)和保證TUNEL 反應(yīng)混合物均勻分布，在孵育過(guò)程中加蓋蓋玻片）。PBS沖洗3次，至此樣品可在熒光鏡下分析結(jié)果。
④信號(hào)轉(zhuǎn)化和分析：擦干樣品周?chē)乃?，加?0ul轉(zhuǎn)化劑-POD，在濕盒中37℃孵育30分鐘（為防止蒸發(fā)和保證轉(zhuǎn)化劑-POD均勻分布，在孵育過(guò)程中加蓋蓋玻片）。PBS沖洗3次，加入50~100μl DAB底物溶液，室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次。
⑤蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，封片，在光鏡下圖象分析：選擇有意義的組織相，經(jīng)登錄、編號(hào)、采集、分析、讀取數(shù)據(jù)、*后存盤(pán)。
注：對(duì)照（條件允許或自認(rèn)為有必要的情況下）：
陰性對(duì)照：經(jīng)過(guò)固定和通透的細(xì)胞樣品加入50μl試劑2以代替TUNEL反應(yīng)混合物，從標(biāo)記步驟以下同上。
陽(yáng)性對(duì)照：經(jīng)過(guò)固定和通透的細(xì)胞樣品用**的核酸酶或DNase I使之產(chǎn)生DNA鏈缺口，從標(biāo)記步驟以下同上。
儀器設(shè)備
一、顯微鏡：日本奧林巴斯 BX51T-PHD-J11
二、CMOS:日本奧林巴斯
三、多功能真彩色細(xì)胞圖象分析管理系統(tǒng)：美國(guó)Media Cybernetics 公司Image-Pro Plus
四、切片機(jī)：德國(guó)萊卡RM2015
五、離心機(jī)：北京離心機(jī)廠(chǎng)LDZ5-2型
六、電子天平：瑞士METTER AE100型
七、移液器：德國(guó)EPPENDORF
八、干燥箱：日本三洋MIR-153型
九、低溫冰箱：日本三洋MDF-382E型
十、恒溫水浴箱：江蘇太倉(cāng)醫(yī)用儀器廠(chǎng)DSHZ-300型
十一、醫(yī)用微波爐：浙江臨安愛(ài)迪儀器廠(chǎng)YWY781B型