抽提植物細(xì)胞的DNA(方法和步驟)
1. 取25g植物幼葉洗淨(jìng), 置研缽中, 加入25ml檸檬酸納液(配方:每公升dH2O中加8.18g Na citrate高溫高壓**), 研磨成泥狀.2.加入150ml均質(zhì)化液(Homogenization Solution) (配方:每公升dH2O中加Na lauryl sulfate 100.0g, Na citrate 2.94g, NaCl 8.18g, 高溫高壓**), 再繼續(xù)研磨30min, 將此泥狀液以雙層紗布過濾, 并擠出紗布上的液體.
3. 將液體適量均分置離心管, 分別加入2倍體積的99﹪酒精, 離心200xg, 5min, (4℃), 倒去上清, 此沉淀中含細(xì)胞核, 加入原液體積1.5倍量的NaCl液 (配方:每公升dH2O中加NaCl 81.8, 高溫高壓**), 充分溷合, 離心10,000xg, 25min, 20℃, 將上清液倒入一清潔無菌小燒杯, 保留.
4. 再加入15ml NaCl液至離心管中, 充分溷合, 再離心10,000xg, 25min, 20℃.
5. 將上清液倒入前已有上清液倒入的同一清潔無菌小燒杯中, 緩緩加入等體積的99﹪酒精, 并以玻棒攪拌, 此時DNA會繞再玻棒上, 繼續(xù)攪拌, 至DNA不再繞在玻棒上.