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技術(shù)文章

大腸菌群革蘭氏染色技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果-ATP熒光檢測儀文章
大腸菌群革蘭氏染色技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果-ATP熒光檢測儀文章

在大腸菌群測定過程中，革蘭氏染色（Gram Stain ）又是一步很重要的鑒定階段，革蘭氏染色的正確性直接關(guān)系到能否正確判斷該菌落是不是大腸菌群，而革蘭氏染色正是一門難以掌握的*基本的**學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，許多分析人員因缺少這方面熟練技術(shù)而顯得對革蘭氏染色結(jié)果沒有把握，有的只好通過多次反復(fù)試驗(yàn)以求得一個(gè)仍不很肯定的判斷結(jié)果，既浪費(fèi)時(shí)間又不能保證染色結(jié)果是否正確，很可能還導(dǎo)致大腸菌群測定錯(cuò)誤或失敗，我們在多年的大腸菌群測定分析的實(shí)踐基礎(chǔ)上，通過純培養(yǎng)一株大腸桿菌（Escherchia coli ）和一株枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis ）并進(jìn)行多種條件下的革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)比較，以觀察革蘭氏染色易受哪些因素影響，從而進(jìn)一步研究這項(xiàng)技術(shù)的*佳操作方法。
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 大腸桿菌
大腸桿菌是大腸菌群中很重要也很有代表性的一種．在某次大腸菌群測定過程中，選取伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基上不同的典型菌落，按《 應(yīng)用微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)法戶〕 中大腸菌群**分離法得到甲基紅試驗(yàn)陽性、VP 試驗(yàn)陰性、發(fā)酵檸檬酸鹽陰性、利用脈酸試驗(yàn)陰性等特征的一株大腸桿菌．
2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
2.1菌齡的影響
2.2**堆積密度影響
涂片時(shí)生理鹽水中**濃厚時(shí)，菌體明顯堆積在一起，從而影響酒精脫色效果，甚至在**堆中仍殘留結(jié)晶紫，因而無論大腸桿菌還是枯草芽抱桿菌，凡密集成堆的常常呈陽性反應(yīng)，而均勻分散的大腸桿菌和枯草芽抱桿菌都能得到正確結(jié)果，因此測定時(shí)應(yīng)以分散開的**的革蘭氏染色反應(yīng)為準(zhǔn)．
我們認(rèn)為在大腸菌群革蘭氏染色時(shí)菌齡、**密集程度、媒染時(shí)間、酒精脫色程度這幾方面因素會對染色的正確性產(chǎn)生影響．在大腸菌群測定時(shí)，革蘭氏染色的*佳條件應(yīng)該是：**在伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)間不宜超過24h ，涂片時(shí)應(yīng)以分散開的**染色為準(zhǔn)，碘媒染時(shí)間以1 min 為宜，酒精脫色程度是革蘭氏染色的關(guān)鍵，脫色時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格控制在2S 一30S 之間。為進(jìn)一步確證革蘭氏染色操作正確，應(yīng)把未知菌伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基上的典型菌落（cdony ）與已知的大腸桿菌和枯草芽抱桿菌的混合菌同片染色，如果混合菌能分辨出陽性菌和陰性菌，則也能肯定未知菌革蘭氏染色結(jié)果是正確的．

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