MTT 溶液的配制方法——懸浮細胞 1、收集對數(shù)期細胞，調(diào)節(jié)細胞懸液濃度1×106/ml，按次序?qū)ⅱ傺a足的1640（無血清）培育基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培育液稀釋 （儲存液100mg/ml，需預試尋找佳稀釋度，1:10-1:20）；③需檢查物10ul；④細胞懸液50ul（即5×104cell/孔），共100ul參入到96孔板（邊緣孔用無菌水填充）。每板設對照（加100ml 1640）。 2、置37℃，5%CO2孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察。 3、每孔參入10 ul MTT試劑溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），繼續(xù)培育4 h。（懸浮細胞推薦使用WST-1，培育4 h后可跳過步驟4，直接酶聯(lián)**檢查儀OD570nm（630nm校準）測量各孔的吸光值） 4、離心（1000轉x10min），小心吸掉上清，每孔參入100 ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10 min，使結晶物充分溶解。在酶聯(lián)**檢查儀OD570nm（630nm校準）測量各孔的吸光值。
MTT 溶液的配制方法——懸浮細胞
1、收集對數(shù)期細胞，調(diào)節(jié)細胞懸液濃度1×106/ml，按次序?qū)ⅱ傺a足的1640（無血清）培育基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培育液稀釋 （儲存液100mg/ml，需預試尋找佳稀釋度，1:10-1:20）；③需檢查物10ul；④細胞懸液50ul（即5×104cell/孔），共100ul參入到96孔板（邊緣孔用無菌水填充）。每板設對照（加100ml 1640）。
2、置37℃，5%CO2孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察。
3、每孔參入10 ul MTT試劑溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），繼續(xù)培育4 h。（懸浮細胞推薦使用WST-1，培育4 h后可跳過步驟4，直接酶聯(lián)**檢查儀OD570nm（630nm校準）測量各孔的吸光值）
4、離心（1000轉x10min），小心吸掉上清，每孔參入100 ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10 min，使結晶物充分溶解。在酶聯(lián)**檢查儀OD570nm（630nm校準）測量各孔的吸光值。