WB通常廣泛用于檢測(cè)復(fù)雜樣品中的少量目的蛋白，或監(jiān)測(cè)蛋白表達(dá)與純化。它通常被認(rèn)為是評(píng)估新抗體及其蛋白檢測(cè)分析方法（如ELISA）的標(biāo)準(zhǔn)之一。WB的主要步驟大致分為以下三步：SDS-PAGE分離蛋白樣品、蛋白樣品轉(zhuǎn)移至膜上以及鑒定膜上的目的蛋白。

根據(jù)WB的這幾大步驟，我們總結(jié)出一個(gè)成功的WB需要具備大致四個(gè)要求：

1.蛋白樣品的分離及洗脫。一個(gè)復(fù)雜的蛋白樣品在凝膠電泳中根據(jù)其分子大小分離，之后在轉(zhuǎn)移過(guò)程中從凝膠上洗脫，如果仍保留在凝膠上則影響WB實(shí)驗(yàn)；

2.吸附于膜。蛋白從凝膠上洗脫后吸附于膜上，轉(zhuǎn)移時(shí)電極方向、轉(zhuǎn)移時(shí)間、膜的處理等都將影響蛋白的吸附；

3.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中蛋白的截留，在轉(zhuǎn)移后的后續(xù)處理過(guò)程中蛋白持續(xù)吸附于膜上，過(guò)分沖洗等做法都將導(dǎo)致蛋白脫落；

4.在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，吸附的蛋白樣品能直接與其檢測(cè)試劑接觸，比如不適當(dāng)?shù)姆忾]等操作將使蛋白樣品被掩蔽，無(wú)法得到WB結(jié)果。

因此，在WB的實(shí)際操作中都應(yīng)注意以上要求為前提進(jìn)行，以期得到良好的**印記。