1、Western Blot可以除掉電泳緩沖液里面的污染鹽 （contaminating electrophoresis buffer salts）這種鹽可以提高轉(zhuǎn)漬緩沖液的導(dǎo)電性（conductivity），讓其增加了整個轉(zhuǎn)漬系統(tǒng)的熱量產(chǎn)生。假設(shè)您用PVDF膜的話就更需要小心了，因為它對十二烷基硫酸鈉（SDS）的濃度非常敏感。SDS濃度過高的話會抑制蛋白的結(jié)合能力，甚至使已經(jīng)結(jié)合的蛋白脫落。
2、Western Blot能夠使您的凝膠在轉(zhuǎn)漬前收縮到不會變的大?。╯hrink to its final size）
這個需要考慮兩個方面：個，轉(zhuǎn)漬系統(tǒng)中產(chǎn)生的熱量可以使凝膠膨脹擴大；**個，聚丙烯酰胺凝膠（polyacrylamide gel）經(jīng)常會在含有甲醇的溶液里收縮（大部分轉(zhuǎn)漬液都用甲醇！）。所以，可以提前冷藏轉(zhuǎn)漬液并且讓凝膠浸泡在轉(zhuǎn)漬液里至少五分鐘。不過假如您的目標(biāo)蛋白很小的話，需要平衡凝膠少于五分鐘，不然分子量較小的蛋白就會從凝膠中擴散（diffuse）到溶液里面了。
3、Western Blot能否防止凝膠和轉(zhuǎn)漬膜變干
假如您剛好有其他的實驗要做，就不妨讓凝膠和轉(zhuǎn)漬膜浸泡在轉(zhuǎn)漬液里等候一下，這樣能夠更好的安排其他的時間。通過網(wǎng)上經(jīng)驗，使用PVDF膜和半干轉(zhuǎn)漬系統(tǒng)轉(zhuǎn)移高分子量的蛋白，浸泡2小時是不影響轉(zhuǎn)漬效率的。不過需要注意這僅適用于分子量比較大的目標(biāo)蛋白。并且若您有所懷疑的話，建議還是別等太久。

那么到底是否需要平衡呢？終還是取決于您的轉(zhuǎn)漬系統(tǒng)：
濕轉(zhuǎn)漬（Wet transfer）: 需要！
半干轉(zhuǎn)漬（Semi-dry transfer）: 需要！
快速真空轉(zhuǎn)漬（Rapid vacuum transfer）: 不需要! 這樣的系統(tǒng)不需要電流回路，所以污染鹽不會影響。而且轉(zhuǎn)漬很快，凝膠也不會收縮。