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染色質(zhì)**共沉淀的發(fā)展
染色質(zhì)**共沉淀
的發(fā)展
近年來ChIP與芯片(Chip, microarray)或測序(Sequencing)相結(jié)合的ChIP-chip和ChIP-Seq技術(shù)是在全基因組水平分析DNA與蛋白質(zhì)相互作用的兩大主要技術(shù)。ChIP-Seq是在ChIP基礎(chǔ)上對得到的DNA片段進行純化與文庫構(gòu)建,然后對富集的DNA片段進行高通量測序。研究人員通過將獲得的數(shù)百萬條序列標(biāo)簽精準(zhǔn)定位到基因組上,進而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段信息。ChIP-chip技術(shù)通過標(biāo)記染色質(zhì)**沉淀富集的DNA片段,和另一個被標(biāo)記不同探針的對照組樣品一起,與DNA芯片雜交,再利用各種生物信息學(xué)方法對收集到的信號進行分析。
ChIP技術(shù)也被用于研究RNA-蛋白的相互作用,其原理與DNA類似,也包括甲醛固定,超聲波破細(xì)胞,**沉淀,交聯(lián)逆轉(zhuǎn),RNA純化和RNA鑒定等步驟。所不同的是,交聯(lián)逆轉(zhuǎn)只用Proteinase K,要進行RNA純化和不含RNase的DNase處理,分析時用RT-PCR,芯片雜交要用cDNA芯片等。
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