一步幫您解決SILAC細胞培養(yǎng)的苦惱

細胞培養(yǎng)穩(wěn)定同位素標記技術(shù)（SILAC）是在細胞培養(yǎng)過程中，利用穩(wěn)定同位素標記的氨基酸結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)，對蛋白表達進行定量分析的一種新技術(shù)。它不僅可以對蛋白質(zhì)進行定性分析，還可通過質(zhì)譜圖上一對輕-重穩(wěn)定同位素峰的比例來反映對應蛋白在不同狀態(tài)下的表達水平，實現(xiàn)對蛋白質(zhì)的定量。

SILAC的技術(shù)優(yōu)勢

1、SILAC不需要對肽段進行同位素標記；

2、因為標記氨基酸可以的滲入到細胞的蛋白中，所以不存在樣品的標記效率問題；

3、因為蛋白質(zhì)被均一的標記，所以蛋白中各個肽段都可以對蛋白進行定量，相互作證；

4、SILAC標記對細胞生長無影響：不影響細胞形態(tài)，不影響細胞對數(shù)生長期，不影響細胞分化；

5、肽段液相行為一致，可以共洗脫。

關(guān)于培養(yǎng)基的選擇

由于SILAC技術(shù)是通過細胞培養(yǎng)進行穩(wěn)定同位素標記，所以我們需要輕標培養(yǎng)基（lightmedium）和帶有穩(wěn)定同位素標記的重標培養(yǎng)基（heavy medium）。

輕標培養(yǎng)基就是我們平時培養(yǎng)細胞用的正常培養(yǎng)基，比如DMEM、MEM和1640。而正常培養(yǎng)基中去掉了精氨酸（Arg）和賴氨酸（Lys），換之以13C標記的精氨酸和賴氨酸，就成了重標培養(yǎng)基。

關(guān)于細胞培養(yǎng)

我們需要把細胞分成兩部分，一部分使用輕標培養(yǎng)基培養(yǎng)，另一部分使用重標培養(yǎng)基培養(yǎng)，除此之外，其它操作步驟一致。

當然了，細胞經(jīng)過6~7個倍增周期之后，用重標培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞中，穩(wěn)定同位素標記的氨基酸就可以滲入到細胞新合成的蛋白中取代了原有氨基酸。建議當在這之后還需要進行標記效率檢測，以標記效率符合SILAC技術(shù)要求，上?；鶢栴D生物擁有上等的技術(shù)可以幫您進行檢測哦。

關(guān)于寄送樣品的量

1、SILAC定量蛋白質(zhì)組學：若提供希望樣品，收集細胞沉淀，PBS沖洗三遍，需要5 X106 或細胞沉淀不少于50 μL

2、SILAC修飾定量組學：相比于普通組學，修飾組學對蛋白需求量較大。需要5 X107 或細胞沉淀不少于500μL。磷酸化修飾定量送樣量位2 X107 或細胞沉淀不少于200μL。