Transwell小室在細胞實驗中很常用,共培養(yǎng)實驗、趨化實驗、細胞遷移、細胞侵襲以及**轉(zhuǎn)運實驗都會用到,但小室的規(guī)格有很多種,不同的實驗需要用到的小室規(guī)格也不同。
根據(jù)transwell板的不同,transwell小室可以分為6孔板小室、12孔板小室和24孔板小室以及和transwell皿配套的75mm直徑的小室;根據(jù)孔徑的不同,從小孔徑到大孔徑又分為0.4μm規(guī)格、3μm規(guī)格、5μm規(guī)格、8μm規(guī)格,不同實驗對小室孔徑的要求也不一樣。
小于3μm孔徑的小室,細胞不會遷移通過,研究不涉及細胞運動能力,不需要細胞穿過聚碳酸酯膜,應(yīng)該選擇3μm以下的孔徑。例如共培養(yǎng)實驗和caco-2細胞轉(zhuǎn)運模型實驗
共培養(yǎng)實驗常用0.4、34μm,將細胞A種于上室,細胞B種于下室,可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的影響。
caco-2細胞轉(zhuǎn)運模型選用0.44μm膜,將Caco-2細胞以約l×10 個/mL,每孔0.5 mL的密度接種在Transwell內(nèi)培養(yǎng)21d左右,前1周隔天換液,1周后每天換液。在模型 建立的同時對其跨膜電阻值及堿性磷酸酶活性進行監(jiān)測來判斷模型是否達到轉(zhuǎn)運實驗要求。
涉及到細胞遷移的實驗要用5.0、8.0、12.0μm的小室,這樣上室細胞可穿過聚碳酸酯膜進入下室,計數(shù)進入下室的細胞量可反映細胞的趨化能力、遷移能力和侵襲能力
趨化性實驗,細胞B對細胞A的趨化作用,將細胞A種于上室,細胞B種于下室,可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的趨化作用;趨化因子對細胞的趨化作用,將細胞種于上室,下室加入某種趨化因子,可研究該趨化因子對細胞的趨化作用。
細胞遷移實驗,常用8.0、12.0μm膜,上室種細胞,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑,計數(shù)進入下室的細胞量可反映細胞的遷移能力。
細胞侵襲實驗,常用8.0、12.0μm膜,原理與細胞遷移實驗類似。上室種細胞,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑,但與細胞遷移實驗不同的是,聚碳酸酯膜上室側(cè)鋪上一層基質(zhì)膠,用以模仿體內(nèi)細胞外基質(zhì),細胞欲進入下室,先要分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)將基質(zhì)膠降解,方可通過聚碳酸酯膜。計數(shù)進入下室的細胞量可反映細胞的侵襲能力。
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