1、養(yǎng)細(xì)胞時(shí)要不要燒瓶口？不燒的話污染了咋辦？

不要燒瓶口！

大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺(jué)得這樣可以避免污染。

不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？

知道為什么嗎？

燒瓶口燒的！

培養(yǎng)基一般都是用碳酸 / 碳酸氫根作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來(lái)。

培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高。

如果大家習(xí)慣了燒瓶口，也未嘗不可。

只是培養(yǎng)液變堿了怎么辦呢？

有些人用稀鹽酸或醋酸重新調(diào) pH 值。這樣做是不對(duì)的。因?yàn)殡m然 pH 值暫時(shí)糾正了，但是培養(yǎng)基的緩沖能力也就沒(méi)多少了。加了這樣的培養(yǎng)液很快就會(huì)變黃。

正確的做法是把裝培養(yǎng)基的瓶口擰松，放到二氧化碳培養(yǎng)箱中，過(guò)夜。讓培養(yǎng)箱中的二氧化碳進(jìn)入培養(yǎng)基。pH 值就可以糾正回來(lái)。

如果不想這么做，也可以在培養(yǎng)基中加 Hepes。

Hepes 不會(huì)揮發(fā)，隨你怎么燒瓶口，培養(yǎng)液的顏色都不會(huì)變。

如果嫌加 Hepes 麻煩，把培養(yǎng)基分裝到小瓶中也是個(gè)辦法。讓培養(yǎng)基開(kāi)幾次瓶就用完。

也可以用培養(yǎng)皿養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng)皿的開(kāi)口比培養(yǎng)瓶大，二氧化碳容易進(jìn)入。

即使加的培養(yǎng)基很紫，放入培養(yǎng)箱后一會(huì)兒就能糾正成櫻桃紅。

如果還是堅(jiān)持用培養(yǎng)瓶，瓶口一定要擰得很松，要那種再擰一圈就要掉下來(lái)才行。

2. 隔多久看一次我的細(xì)胞？為啥我**到晚都在看，細(xì)胞老是長(zhǎng)不好？

不要頻繁看細(xì)胞！

對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。

細(xì)胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。

實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處，特別是對(duì)原代細(xì)胞或是**磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞。

培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的！

細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周?chē)纬捎欣谏L(zhǎng)的局部環(huán)境。

你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了！

3. 什么時(shí)候中止消化？

不要怕消化。

在傳代的時(shí)候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度，早早地終止消化。

細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。

其實(shí)，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大！

實(shí)驗(yàn)室大師兄在做血管平滑肌原代的時(shí)候，37 度消化過(guò)夜，細(xì)胞也沒(méi)事。我一般是等細(xì)胞完全變圓后再中止消化，細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。

還有，動(dòng)作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡！氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的！

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