一、實驗介紹 ：

當單個細胞在體外增殖6代以上，其后代所組成的細胞群體，成為集落或克隆。每個克隆含有50以上的細胞，大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力。各種理化因素可能導(dǎo)致細胞的克隆形成能力發(fā)生改變。通過一定的實驗方法可以對細胞的克隆形成能力進行檢測。

二、實驗方法：

平板集落形成實驗、軟瓊脂集落形成實驗

(a) 平板集落形成實驗：本法適用于貼壁生長的細胞和正常培養(yǎng)的細胞

(b) 軟瓊脂集落形成實驗：本法適用于非錨著依賴性生長的細胞，如骨髓造血干細胞、腫瘤細胞株、轉(zhuǎn)化細胞系。

三、注意事項：

(a) 瓊脂對熱和酸不穩(wěn)定，若反復(fù)加熱，容易降解而產(chǎn)生毒性，且硬度下降。因此高壓**后應(yīng)進行分裝；

(b) 細胞在進行克隆形成實驗時要求有95%以上的分散度，否則結(jié)果的準確度會受到很大影響；

(c) 軟瓊脂與細胞混合時溫度不能超過40℃，否則將會**/死細胞；

(d) 接種時細胞密度適度，不可過高。

   細胞在低密度、非貼壁狀態(tài)條件下培養(yǎng)，生存率明顯下降，永生細胞系/株克隆形成率可達到10%以上，但初代培養(yǎng)細胞和有限傳代細胞系克隆形成率僅為0.5%-5%，甚至無法形成單個克隆。因此，為了提高克隆形成率，有時需要在培養(yǎng)基中添加胰島素、地塞米松等促克隆形成物質(zhì)。

細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數(shù)，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞?？寺⌒纬陕史从臣毎后w依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學(xué)性狀不同，細胞克隆形成率差別也很大，一般初代培養(yǎng)細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強；二倍體細胞克隆形成率弱，轉(zhuǎn)化細胞系強；正常細胞克隆形成率弱，腫瘤細胞強。并且克隆形成率與接種密度有一定關(guān)系，做克隆形成率測定時，接種細胞一定要分散成單細胞懸液，直接接種在碟皿中，持續(xù)一周，隨時檢查，到細胞形成克隆時終止培養(yǎng)。

四、服務(wù)周期：1-2個月

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