1.組織培養(yǎng)試劑

優(yōu)化細胞生長條件。只使用新鮮配制的培養(yǎng)基和添加劑，并經可能減少所用試劑的變更。

基礎培養(yǎng)基—目前所使用的各種市售培養(yǎng)基(如，RPMI 1640和DMEM)。培養(yǎng)基的成分包括營養(yǎng)物質(氨基酸，葡萄糖)，維生素，無機鹽，和緩沖物質。有些成分非常不穩(wěn)定，因此如果不在使用時新鮮加入就可能會產生問題。務必要使培養(yǎng)基避光保存。因為已知有一些組分和緩沖物質，如HEPES，當暴露于光照下就會分解產生細胞毒性物質。另外，血清，添加劑，來自于培養(yǎng)箱內的污染物、化學物質，或**/細胞的污染也都可能影響到細胞生理。

2.細胞生長狀態(tài)

密切觀察您的細胞;確保它們狀態(tài)良好。在開始轉染細胞之前，先制定一個適當?shù)姆N板方案，使細胞密度從轉染開始到結束都保持好狀態(tài)。增加成功幾率—細胞是轉染過程中的一個關鍵元素，它可以是影響結果的一致性和質量的重要的變量。此外，還常用促有絲分裂刺激物(如，病毒轉化，生長因子，條件培養(yǎng)基，以及滋養(yǎng)細胞)來活化原代培養(yǎng)細胞。貼壁細胞相比較懸浮細胞—在轉染效率方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的差異顯著。天生趨于懸浮的細胞(如HL 60，Jurkat)非常難以轉染。相反，天生為貼壁的細胞(如HEK，CHO)則可適應懸浮生長的條件。

3.載體DNA

檢查純化所得的載體質量。確定支持其正常功能的基因序列是否適合于您的細胞體系。在對您細胞體系的參數(shù)進行測定時，一定要選用一種您已知具有功能的對照載體。載體的完整性—種載體是否具有功能取決于它結構的完整性。轉染效率受到質粒制備物的超螺旋結構和舒展結構之間比例、雙螺旋中斷、核酸酶的降解，以及來自于儲存和處理過程中的物理壓力的影響。

4.轉染方案

轉染復合物的制備—諸如轉染試劑/DNA配比，離子強度，緩沖液pH值，以及溫度等變量都會影響到轉染復合物的組成和功能。質粒既可在無菌水又可在TE緩沖液中稀釋。如果您要使用一種市售的轉染試劑，就應當仔細閱讀該試劑所提供的使用說明。需要對試劑提供方給予一定的信賴;除非您有很好的理由支持您做出改變，否則就應當嚴格按照他們所推薦的轉染方案。在不含血清或其他蛋白的培養(yǎng)基中制備轉染復合物;如果制備復合物所使用的培養(yǎng)基含有血清，它就會對轉染產生抑制。推薦使用Entranster-H4000，培養(yǎng)基可加***和血清，有助于提高轉染效率。

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