**類是皮下移植瘤動(dòng)物模型
顧名思義，這種模型的建立是將腫瘤細(xì)胞或腫瘤組織直接種植在小鼠的皮下。種植的點(diǎn)也有講究，一般選擇血運(yùn)**回流豐富的腹股溝和腋窩?？筛鶕?jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇移植點(diǎn)，統(tǒng)一移植點(diǎn)的位置，除了遵守實(shí)驗(yàn)統(tǒng)一的條件外，待腫瘤成熟后收集腫瘤時(shí)留下照片證據(jù)也顯得美觀。
裸鼠（Balb/c 鼠， 無(wú)毛發(fā)， T **細(xì)胞缺陷）是比較常見(jiàn)和常用的實(shí)驗(yàn)用鼠，尤其是在皮下移植瘤腫瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)然，這種腫瘤模型也有缺陷，即不能很準(zhǔn)確的模擬正常人體腫瘤發(fā)**展的過(guò)程。
腫瘤細(xì)胞移植時(shí)的簡(jiǎn)要步驟
首先準(zhǔn)備好要移植的腫瘤細(xì)胞（細(xì)胞量根據(jù)不同腫瘤略有不同，我們所用的前列腺癌細(xì)胞系每個(gè)移植點(diǎn)一般選擇 1x106 左右；腫瘤細(xì)胞可與基質(zhì)膠 1:1 混勻后用 1 ml 注射器吸取，基質(zhì)膠能夠給腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，有助于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)）。
戴無(wú)菌手套后，將小鼠用左手大拇指和食指捏住頸部皮膚，然后將鼠尾用左手無(wú)名指和小指固定于左手大魚際。將腋窩或腹股溝用 75% 酒精** 3 次。右手持吸有腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)膠混合液的注射器，在腹股溝或腋窩的位置，45 度斜角進(jìn)針，注意不要突破腹膜，將針頭保持于皮下位置。
然后近水平位置將針頭幾乎完全插入皮下，將混有基質(zhì)膠的腫瘤細(xì)胞注射入皮下（腫瘤細(xì)胞量約 1x106），快速退針，左手食指輕壓針孔約 1 min 后將小鼠放回飼養(yǎng)籠中，注意將小鼠側(cè)放于墊料上，放置其不適嘔吐時(shí)嘔吐物誤入呼吸道引起窒息。2～3 h 后觀察小鼠是否蘇醒。
如果是利用腫瘤組織（人體腫瘤標(biāo)本或小鼠移植瘤傳代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，則需要首先將腫瘤組織用無(wú)菌 PBS（或 1640 培養(yǎng)基）洗滌 3 次，然后在無(wú)菌平皿上切成或用無(wú)菌剪刀剪成<1 mm3 體積的小塊（種植前可裹基質(zhì)膠）備用。
將小鼠用水合氯醛麻醉后平臥于解剖板上，四肢用膠帶固定，將腋窩或腹股溝用 75% 酒精** 3 次，然后用眼科剪剪開約 0.5 cm 小口，小鑷子將皮下筋膜與皮膚分開，然后將腫瘤組織放入貼近腹股溝或腋窩的深部，每個(gè)位置放置 2～3 塊腫瘤組織，注意不同組間統(tǒng)一放置腫瘤組織塊數(shù)以保持一致。
然后縫合皮膚，**后將小鼠側(cè)臥位放置于飼養(yǎng)籠的墊料上。2～3 h 后觀察小鼠是否蘇醒。
影響皮下移植瘤腫瘤形成因素
1. 移植腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)：腫瘤細(xì)胞應(yīng)選取傳代后匯合度達(dá) 60%～80% 為理想狀態(tài)，此時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)入對(duì)數(shù)期，生長(zhǎng)速度快，狀態(tài)理想，易于形成移植瘤。
2. 腫瘤細(xì)胞收集后種植到小鼠皮下不宜時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，應(yīng)盡快種植到小鼠體內(nèi)，我們一般在 2 h 內(nèi)完成。
3. 裹有基質(zhì)膠的腫瘤細(xì)胞種植比單純的腫瘤細(xì)胞種植更易成瘤?；|(zhì)膠為腫瘤細(xì)胞在接受宿主營(yíng)養(yǎng)之前提供充足營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，起到橋梁的作用。
4. 腫瘤組織移植種植時(shí)，應(yīng)將腫瘤組織切成 1 mm3 的小塊，過(guò)小或過(guò)大均不利于腫瘤形成，組織塊過(guò)大時(shí)不利于腫瘤組織中的腫瘤細(xì)胞接觸新的環(huán)境生長(zhǎng)，組織塊過(guò)小時(shí)則腫瘤細(xì)胞過(guò)少，大部分在切塊時(shí)破壞，均不利于腫瘤形成。
另外從腫瘤組織離體到種植到小鼠皮下不宜時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，我們一般在 4 h 內(nèi)完成移植種植。
02**類是腎被膜下移植瘤動(dòng)物模型
腎被膜下血運(yùn)較為豐富，比較適合那些對(duì)腫瘤營(yíng)養(yǎng)環(huán)境要求苛刻的腫瘤細(xì)胞。
用于腎被膜下移植瘤的小鼠主要是 NOD-D 鼠（D 鼠與非肥胖糖尿病鼠（nonobese diabetic,NOD）雜交而來(lái)，T 和 B **細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、循環(huán)組分及部分 NK 細(xì)胞缺陷），這種小鼠表型為白色毛發(fā)小鼠，對(duì)于飼養(yǎng)條件較為苛刻，需要無(wú)菌的 SPF 級(jí)飼養(yǎng)環(huán)境。
不易成瘤的腫瘤組織一般選擇腫瘤腎被膜下種植移植瘤模型。建立模型時(shí)，同樣首先需要將腫瘤組織用無(wú)菌 PBS（或 1640 培養(yǎng)基）洗滌 3 次，然后在無(wú)菌平皿上切成或用無(wú)菌剪刀剪成<1 mm3 體積的小塊（種植前可裹基質(zhì)膠）。
將小鼠用水合氯醛麻醉后俯臥于解剖板上，四肢用膠帶固定，在肋脊角靠下的位置剪去約 1.5 cm 直徑的皮膚毛發(fā)以備皮。75% 酒精** 3 次，用眼科剪將皮膚剪開約 0.5 cm 小口，依次分離皮膚、皮下、側(cè)腹膜。
找到腎臟位置，小心仔細(xì)將腎臟提至皮膚切口出，用小尖鑷子戳開腎被膜一小口，仔細(xì)將小塊腫瘤組織送入腎被膜下，一般 2～3 塊。然后將腎臟送回腹腔，依次縫合腹膜、皮下組織和皮膚。**后將小鼠放回飼養(yǎng)籠內(nèi)。2～3 h 后觀察是否蘇醒。
影響腎被膜下移植瘤腫瘤動(dòng)物模型形成因素
1. 腫瘤組織處理是否恰當(dāng)，除和皮下移植瘤相同處理外，應(yīng)注意多裹些基質(zhì)膠在腫瘤組織小塊上，在塞進(jìn)腎被膜下時(shí)應(yīng)盡量注意盡量保持腎被膜完整。我們?cè)鴨渭儗⒛[瘤組織種植到腎被膜下，成瘤率較低，而裹有基質(zhì)膠的腫瘤組織較易成瘤。
2. 注意手術(shù)時(shí)及時(shí)找到出血點(diǎn)并及時(shí)止血，側(cè)腹膜解剖時(shí)損傷，誤傷腎臟、腎臟血管等，如不及時(shí)處理，很容易引起出血過(guò)多導(dǎo)致失血性休克。尤其是陰性出血不易察覺(jué)，在**天查看小鼠情況時(shí)發(fā)現(xiàn)小鼠已死亡等。
3. 手術(shù)器械需****，操作臺(tái)需要無(wú)菌環(huán)境，避免因感染引起術(shù)后小鼠死亡。
03第三類是原位移植瘤動(dòng)物模型
為了更好的模擬腫瘤的生長(zhǎng)情況選擇發(fā)生腫瘤的器官為移植點(diǎn)。常用的小鼠仍為 NOD-D 鼠。采取開放手術(shù)打開暴露相應(yīng)的發(fā)生腫瘤的對(duì)應(yīng)的小鼠器官，將腫瘤組織或腫瘤細(xì)胞種植到器官內(nèi)。此方式因不易操作，且小鼠手術(shù)后死亡率較高，一般不常選用。
小鼠實(shí)驗(yàn)分組一般 5 只以上為一組，分別設(shè)置實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。術(shù)前將小鼠于動(dòng)物房飼養(yǎng)一周適應(yīng)環(huán)境，術(shù)前術(shù)后稱量記錄體重。小鼠移植瘤一般 2 w 左右即可形成，可用游標(biāo)卡尺記錄瘤體長(zhǎng)短徑，每周 3 次記錄。一般待瘤體體積為 1 cmx1 cm 時(shí)處死小鼠，收集腫瘤接著在小鼠身上傳代處理或進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤動(dòng)物模型構(gòu)建關(guān)鍵要細(xì)心，尤其是腫瘤細(xì)胞選擇，腫瘤組織塊處理上要仔細(xì)認(rèn)真，這是影響模型成功建立的關(guān)鍵，還有移植手術(shù)時(shí)更要耐心細(xì)致，不要還沒(méi)有建立就已經(jīng)失敗。
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