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公司新聞

科研實(shí)驗(yàn)中常規(guī)的四大實(shí)驗(yàn)

一、WB

印跡法(blotting)是指將樣品轉(zhuǎn)移到固相載體上,而后利用相應(yīng)的探測(cè)反應(yīng)來(lái)檢測(cè)樣品的一種方法。1975 年,Southern 建立了將 DNA 轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(NC 膜)上,并利用 DNA-RNA 雜交檢測(cè)特定的 DNA 片段的方法,稱為 Southern 印跡法。而后人們用類似的方法,對(duì) RNA 和蛋白質(zhì)進(jìn)行印跡分析,對(duì) RNA 的印跡分析稱為 Northern 印跡法,對(duì)單向電泳后的蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱為 Western 印跡法,對(duì)雙向電泳后蛋白質(zhì)分子的印跡分析稱為 Eastern 印跡法。


二、熒光定量 PCR 技術(shù)

是指在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè) PCR 進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 是在普通 PCR 定性技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的核酸定量技術(shù)。在熒光定量 PCR 技術(shù)發(fā)展的過(guò)程中,兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:一是 Taq DNA 多聚酶的 5′ 端核酸外切酶活性被發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光標(biāo)記的探針,使得間接檢測(cè) PCR 產(chǎn)物成為可能;另一個(gè)是熒光雙標(biāo)記探針被使用在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時(shí)地監(jiān)測(cè)反應(yīng)全過(guò)程。目前該技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)科學(xué),食品、醫(yī)學(xué)、**開(kāi)發(fā)以及分子生物學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域,如:DNA 或 RNA 的定量檢測(cè)應(yīng)用;基因表達(dá)研究的檢測(cè)應(yīng)用,醫(yī)學(xué)及**開(kāi)發(fā)中的檢測(cè)應(yīng)用等。


三、**組織化學(xué)也稱**細(xì)胞化學(xué)

是將**學(xué)技術(shù)與組織病理學(xué)技術(shù)結(jié)合在一起,能對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成份、組織結(jié)構(gòu)成分、微生物結(jié)構(gòu)等進(jìn)行顯示和定位,從而分析、研究生物體的細(xì)胞組織代謝、功能及形態(tài)變化規(guī)律的科學(xué)。目前該技術(shù)在腫瘤的診斷應(yīng)用包括:

1. 確定細(xì)胞類型:通過(guò)特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)抗原成分,以確定細(xì)胞類型。如角蛋白是上皮性標(biāo)記,前列腺特異性抗原僅見(jiàn)于前列腺上皮,甲狀腺球蛋白抗體是甲狀腺濾泡型癌的敏感標(biāo)記,而降鈣素抗體是甲狀腺髓樣癌的特有標(biāo)記。有些細(xì)胞(如表皮內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、**結(jié)內(nèi)指突狀和樹(shù)突狀網(wǎng)織細(xì)胞)光鏡下不易辨認(rèn),但**組化標(biāo)記(S-100 蛋白等)能清楚顯示其形態(tài)。

2. 辨認(rèn)細(xì)胞產(chǎn)物:利用某些細(xì)胞產(chǎn)物為抗原制備的抗體,可作為相應(yīng)產(chǎn)物的特殊標(biāo)記,如***細(xì)胞產(chǎn)生的各種**,大多數(shù)可用**組化技術(shù)標(biāo)記出來(lái),據(jù)此可對(duì)***腫瘤作功能分類,檢測(cè)分泌異位**的腫瘤等。

3. 發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶:某些癌的早期轉(zhuǎn)移有時(shí)與**結(jié)內(nèi)竇性組織細(xì)胞增生不易區(qū)別。用常規(guī)病理組織學(xué)方法要在一個(gè)組織中認(rèn)出單個(gè)轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞或幾個(gè)細(xì)胞是不可能的,而采用**組化方法(如用上皮性標(biāo)志)則十分有助于微小(癌)轉(zhuǎn)移灶的發(fā)現(xiàn)。對(duì)轉(zhuǎn)移性腫瘤也可借助**組化標(biāo)志尋找原發(fā)瘤,如骨組織內(nèi)有前列腺特異性抗原陽(yáng)性細(xì)胞,提示前列腺癌轉(zhuǎn)移。

4. 探討腫瘤起源或分化表型:一些來(lái)源不明的腫瘤長(zhǎng)期爭(zhēng)論不休,通過(guò)**組化標(biāo)記取得共識(shí)。如顆粒性肌母細(xì)胞瘤,曾被認(rèn)為是肌源性的,但該腫瘤肌源性標(biāo)記陰性,而神經(jīng)性標(biāo)記陽(yáng)性,證明為神經(jīng)來(lái)源(可能來(lái)自神經(jīng)鞘細(xì)胞)。分化很差的腫瘤病理上常按細(xì)胞形態(tài)分為梭形細(xì)胞腫瘤、小圓細(xì)胞腫瘤等,通過(guò)多種標(biāo)記的聯(lián)合應(yīng)用,也可能確定來(lái)源。


四、原位雜交組織化學(xué)

是運(yùn)用核酸分子間堿基互補(bǔ)的性質(zhì)結(jié)合組織化學(xué)和**組織化學(xué)技術(shù),在組織切片(或細(xì)胞片)上顯示特異核酸(DNA 或 RNA)順序的一種技術(shù)。

原位雜交組織化學(xué)的基礎(chǔ):

1. 合適的探針:探針的種類和特異性;適宜的長(zhǎng)度;良好的標(biāo)記。

2. 優(yōu)良的組織保存:被測(cè)組織內(nèi)核酸和組織結(jié)構(gòu)完好;可靠的實(shí)驗(yàn)試劑和正確的實(shí)驗(yàn)方法;相當(dāng)?shù)男螒B(tài)學(xué)知識(shí):細(xì)胞生物學(xué),組織胚胎學(xué),病理解剖學(xué)等。


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