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小鼠安死術(shù)方法的分析研究

實驗動物福利是實驗動物科學(xué)的重要組成部分,實施安樂死是實驗動物福利的重要內(nèi)容之一。如前所述,我國也已對實驗動物安樂死提出明確要求。本研究結(jié)果顯示,實驗動物安樂死在實施層面還存在欠缺,現(xiàn)就調(diào)查中發(fā)現(xiàn)的問題進行討論并提出相應(yīng)建議。

安死術(shù)在撰寫和發(fā)表層面被忽視

本研究納入的890篇文獻中僅有2篇**提到 “安死術(shù)”和“ 安樂死”,占0.22%(2/890);僅有39.44%的**明確提到小鼠處死方法。 提到處死方法的文獻對小鼠處死方法的描述也不夠嚴(yán)謹(jǐn),如窒息法處死、引頸處死、脫頸活殺等。麻醉劑種類對過量麻醉處死小鼠技術(shù)是核心內(nèi)容,但提到麻醉劑種類的只占53.33%。作者認(rèn)為各學(xué)術(shù)雜志應(yīng)通過加強發(fā)表環(huán)節(jié)福利倫理要求,以規(guī)范動物實驗撰寫,進而促進我國科學(xué)安樂死在實際工作的實施。

頸椎脫臼和斷頭是使用率較高的兩種方法

這兩種方法都屬于物理方法,當(dāng)有動物體重限制并且由有經(jīng)驗和操作熟練的人實施時使用物理方法是人道的。 歐盟指令2010/63/EU提出,在無其他方法的前提下可接受斷頭處死嚙齒類動物。美國獸醫(yī)協(xié)會(AmericanVeterinary Medical Association,AVMA)指南指出“頸椎脫臼和斷頭”條件下對大鼠(體重 <200g)和小鼠是可以接受的。所指條件集中在操作層面,包括:(1)人員需經(jīng)過培訓(xùn);(2)由技術(shù)熟練和過關(guān)的人員實施;(3)相關(guān)設(shè)備(主要針對斷頭法)合適。 英國《動物法案》要求頸椎脫臼處死前,需進行**或麻醉。 頸椎脫臼法的缺點為不是每次操作都會使動物迅速死亡,有時動物會恢復(fù)呼吸/意識,還存在意識和感覺,而這正是動物痛苦的根源。Carbone等的研究,使用三種造成頸椎脫臼的方法即(1)操作者一手固定尾部,另一手按住動物頸部做扭轉(zhuǎn)動作;(2)用止血鉗輔助;(3)胸椎部脫臼(實施頸椎脫臼時可能發(fā)生這種意外情況),結(jié)果顯示成功率高的**種方法,尚有10%(2/22)的動物在實施頸椎脫臼后持續(xù)呼吸180s以上。綜上所述,頸椎脫臼方法處死小鼠是可以的,但操作者技能合格,實施后確認(rèn)動物的死亡。    

使用過量麻醉劑進行安樂死

該類**抑制呼吸**,過量深度麻醉可導(dǎo)致窒息并伴有心臟驟停,能使動物安靜死去,產(chǎn)生的不適感輕。故由技術(shù)熟練的人員靜脈注射效果該類**效果好。三溴乙醇屬于醇類物質(zhì),通過抑制神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)引起麻醉和缺氧,終導(dǎo)致死亡。三溴乙醇可用于小鼠安樂死,但如用于更大動物安樂死,所需用量過大、不易實現(xiàn)。水合氯醛通過抑制呼吸**進而血氧不足而引起死亡,動物會伴有喘息、肌肉痙攣并發(fā)出聲音。因其不佳反應(yīng)嚴(yán)重,美國AVMA不推薦用于安樂死**。乙醚具有刺激性、易燃易爆的特性,也不推薦用于安樂死。使用該方法安樂死時需強調(diào)的是:針對不同物種,選用合適的麻醉劑、劑量濃度和給藥途徑。

動物實驗中存在動物麻醉后進行解剖取材的情況,動物由于失去組織、臟器或大量失血而死亡

實驗期間需密切觀察動物反應(yīng),動物在手術(shù)中瀕死期免遭痛苦:(1)動物進入深度麻醉后再進行操作;(2)操作者技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)熟練;(3)手術(shù)前制定麻醉方案,避免術(shù)中動物遭受更多的痛苦;(4)觀察動物的狀態(tài),避免動物有知覺時進行手術(shù)。

二氧化碳窒息法

盡管此次調(diào)查僅有2篇**使用該方法處死小鼠,但鑒于二氧化碳窒息法處死動物的效率高,操作者的心理負(fù)擔(dān)較小,近年來有大量介紹和推薦使用二氧化碳窒息法的**,現(xiàn)實中二氧化碳窒息法的使用也有擴大的趨勢。但新研究表明,嚙齒類動物對二氧化碳有明顯的厭惡感,高于濃度的二氧化碳會造成動物的疼痛。實驗動物福利權(quán)威組織也認(rèn)同這一看法,故要求執(zhí)行二氧化碳窒息法,須嚴(yán)格控制氣體濃度升高的速率。AVMA要求二氧化碳置換率為每分鐘10%~30%容器體積,以在引起疼痛之前,動物已失去意識。而目前市面部分二氧化碳窒息機不能控制進氣量,一些自制儀器也存在這一問題。 故作者建議,應(yīng)嚴(yán)格選用可控制氣體流速的二氧化碳窒息設(shè)備實施安樂死,條件不滿足時不應(yīng)使用。

實驗動物安死術(shù)對實驗人員心理健康的影響

對實驗動物實施科學(xué)而嚴(yán)謹(jǐn)?shù)陌矘匪?,也是對實驗人員的一種保護,特別是心理上的。 當(dāng)某些工作人員要較高頻率地處死動物或作為旁觀人員面臨處死動物的場景時,經(jīng)常會產(chǎn)生消極、厭惡情緒,影響心理健康。 而當(dāng)采用認(rèn)可的安樂死方法處死動物時,能顯著降低這種消極、負(fù)面的心理影響。

綜上所述,簡單評價某種處死方法是否為安死術(shù)是困難的,也是不科學(xué)的。選擇適合的安死術(shù)需從動物種類、動物遭受的疼痛和痛苦、人員**性、成功率、**獲得方式、對操作者情緒影響等多方面考慮。實際工作中,選擇適合的安死術(shù)還需由獸醫(yī)結(jié)合現(xiàn)實情況從專業(yè)角度做出判斷。選定方法后,由掌握技術(shù)要點、操作熟練的人員實施安死術(shù)也至關(guān)重要,包括動物的抓取與保定、靜脈穿刺、麻醉劑劑量以及二氧化碳流速、安樂死箱的用法等。故提高我國實驗動物福利,真正仁慈地結(jié)束實驗動物的生命,制定政策法規(guī)僅為**步,還需要加強相關(guān)技術(shù)的研究和培訓(xùn),讓實驗人員切實掌握安死術(shù)。

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