描述

內(nèi)在小鼠 ERFETM的ELISA 是一種檢測試劑盒，設計用于定量血清中的小鼠赤鐵酮。該試劑盒不含巰基乙醇、疊氮化物或汞基防腐劑。

小鼠赤蘚鐵酮的檢測基于雙抗體夾心ELISA方法。96孔微孔板測定板預涂有抗小鼠紅鐵酮多克隆抗體。將小鼠血清樣品、標準品或?qū)φ找号c緩沖液混合并在測定板中孵育。樣品中存在的小鼠紅蘚鐵酮與測定板上的固定化抗體結(jié)合。然后洗滌板以去除未結(jié)合的小鼠紅鐵酮。加入與生物素偶聯(lián)的第//二種抗小鼠紅鐵酮抗體，然后加入HRP-SA偶聯(lián)物，HRP-SA偶聯(lián)物與生物素化的抗小鼠赤紅鐵酮結(jié)合。光密度 （OD） 是通過添加 TMB 來測量的，反應產(chǎn)生藍色，并且隨著終止溶液的加入而停止顯影。在酶標儀上以 450nm 處讀取 OD，并通過繪制標準曲線的對數(shù)濃度與其相應的 OD 來制備標準曲線。顏色的強度與樣品中 ERFE 的濃度成正比?？倷z測運行時間不到 3 小時。

注意：

根據(jù)我們的研究，健康小鼠（C57BL / 6）的血清ERFE濃度基本上無法檢測到（低于檢測限）。在紅細胞生成無效（β-地中海貧血）的小鼠模型中，血清ERFE濃度范圍為1-2 ng / ml。

標準曲線：

每次運行采用包含零點的八點標準曲線。下圖所示為典型標準曲線示例（注意：實際計算請勿直接使用該示例曲線）。