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反相 LC-選擇合適的流動(dòng)相溶劑你知咩?


用于反相 LC 的流動(dòng)相可以是純?nèi)軇?、混合溶劑的組合或含有緩沖液和添加劑的溶劑。流動(dòng)相溶劑充當(dāng)分析物通過(guò)固定相的載體，而不影響結(jié)果。實(shí)際上有數(shù)百種溶劑可供選擇，這使得確定哪一種適合您的需求變得具有挑戰(zhàn)性。
流動(dòng)相溶劑特性
幸運(yùn)的是，流動(dòng)相溶劑的一些特性可以幫助您為反相 LC 分析選擇合適的溶劑。這些特征包括：
1.溶劑純度——在 LC 中選擇作為流動(dòng)相的溶劑應(yīng)為 HPLC 或 MS 級(jí)，應(yīng)進(jìn)行過(guò)濾和超聲處理，以確保 UV 光譜中的吸光度zui小且不含氣泡。
2.溶劑粘度- 反相流動(dòng)相應(yīng)具有zui佳粘度，以幫助確保通過(guò) HPLC 色譜柱固定相的zui佳線速度，從而提供更窄和更尖銳的峰，從而提高分析的整體靈敏度。
3.折光率——這是使用折光率檢測(cè)器時(shí)的一個(gè)關(guān)鍵考慮因素。理想情況下，當(dāng)使用 RI 檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相和樣品稀釋劑應(yīng)具有相似的折射率以避免出現(xiàn)負(fù)峰，換句話說(shuō)，樣品應(yīng)在流動(dòng)相中制備。
4.溶劑沸點(diǎn)- zui好選擇沸點(diǎn)低的溶劑以提高回收率，特別是在 LC-MS 中，揮發(fā)性更強(qiáng)的溶劑將改善離子化，從而提高 MS 靈敏度。
5.無(wú)腐蝕性——流動(dòng)相溶劑不得腐蝕流路中的 HPLC 管、泵閥、密封件和其他部件。
6.溶劑毒性– 確保溶劑無(wú)毒并且使用穩(wěn)定版。
7.溶劑混溶性——選擇與樣品完全混溶的溶劑。分析物也必須可溶于其中。否則，您將在色譜柱入口篩板處遇到樣品沉淀，從而產(chǎn)生高反壓、基線問題、分析物的不太敏感的峰以及色譜圖中的峰面積和峰形問題。
8.流動(dòng)相透明度– 選擇以檢測(cè)波長(zhǎng)傳輸?shù)牧鲃?dòng)相。
9.洗脫強(qiáng)度——這是溶劑從固定相中洗脫目標(biāo)分析物的能力。洗脫強(qiáng)度越高，溶劑越有效，選擇性越好。流動(dòng)相溶劑應(yīng)具有zui佳和足夠的洗脫強(qiáng)度，以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分析物的選擇性。

考慮到這些特性，大多數(shù)色譜工作者首要選擇的流動(dòng)相溶劑是乙腈，因?yàn)樗哂?/span>zui佳粘度、良好的 UV 透明度和足夠的洗脫強(qiáng)度。
其他常見的溶劑包括甲醇，它的粘度比乙腈高（特別是與水混合時(shí)）和四氫呋喃，它具有高洗脫強(qiáng)度，但毒性更大并且存在**問題。甲基叔丁基醚可作為四氫呋喃的替代品。

選擇流動(dòng)相緩沖液和添加劑
除了選擇流動(dòng)相溶劑外，您還需要選擇合適的緩沖液和/或其他添加劑。緩沖液用于控制流動(dòng)相的 pH 值。酸性添加劑（pH 為 2 至 4）用于大多數(shù)制藥應(yīng)用，而堿性流動(dòng)相（pH 大于 8）用于為堿性分析物實(shí)現(xiàn)更高的保留和改進(jìn)的峰形。
簡(jiǎn)單的流動(dòng)相是zui好的
為反相 LC選擇更簡(jiǎn)單的流動(dòng)相已成為常態(tài)。這背后的實(shí)用性是顯而易見的，隨著色譜柱固定相和色譜柱制造技術(shù)的進(jìn)步以及極其靈敏、高分辨率儀器的可用性，減少了對(duì)緩沖液和其他添加劑的需求，而這些需求以前是提供良好色譜所必需的。
例如，傳統(tǒng)上將乙腈與 95% 的水混合以通過(guò)確保兩種流動(dòng)相在粘度和表面張力方面相似來(lái)提高混合效率。然而，隨著泵的改進(jìn)和在線混合器的引入，這變得越來(lái)越不必要。
除此之外，隨著使用具有線性梯度分布的更簡(jiǎn)單的溶劑，方法變得更加穩(wěn)健，并且隨著高分辨率 MS 技術(shù)的快速發(fā)展，它進(jìn)一步減少了 LC 方法中對(duì)復(fù)雜流動(dòng)相的需求。

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