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- 產(chǎn)品名稱(chēng)：高純度無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒大提試劑盒（沉淀法）
- 產(chǎn)品型號(hào)：PD1516-02
- 產(chǎn)品展商：Biomiga
- 產(chǎn)品價(jià)格：0.00 元
- 折扣價(jià)格：0.00 元
- 產(chǎn)品文檔：無(wú)相關(guān)文檔
- 發(fā)布時(shí)間：2013-01-12
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簡(jiǎn)單介紹
高純度無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒大提試劑盒（沉淀法）（High Pure Endotoxin free Plasmid Maxi kit）在PD1513的基礎(chǔ)上，采用獨(dú)特的Endoclean Buffer可從質(zhì)粒中去除內(nèi)**，操作簡(jiǎn)便，重復(fù)使用可使內(nèi)**含量低于0.1EU/μg質(zhì)粒。
產(chǎn)品描述
高純度無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒大提試劑盒（沉淀法）（High Pure Endotoxin free Plasmid Maxi kit）采用獨(dú)特的Endoclean Buffer可從質(zhì)粒中去除內(nèi)**，操作簡(jiǎn)便，重復(fù)使用可使內(nèi)**含量低于0.1EU/μg質(zhì)粒。
高純度無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒大提試劑盒（沉淀法）組分：
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Catloga#
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PD1516-00
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PD1516-01
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PD1516-02
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Preps
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2
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10
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25
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Buffer A1
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22 mL
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110 mL
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270 mL
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Buffer ER*
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1.2 mL
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5.5 mL
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13 mL
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Buffer B1
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22 mL
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110 mL
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270 mL
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Buffer D1
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2.5 mL
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11 mL
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27 mL
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Buffer N3
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27 mL
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135 mL
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330 mL
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EndoCleanBuffer
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5 mL
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25 mL
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60 mL
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Buffer KB
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22 mL
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110 mL
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270 mL
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RNase A
(20 mg/mL)
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2.2 mg
(110 µL)
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11 mg
(550 µL)
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27 mg
(1.35 mL)
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Endofree Elution Buffer
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6 mL
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30 mL
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60 mL
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User menu
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1
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1
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1
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保存條件：
Buffer A1在加入RNase A后，需放在4°C保存，Buffer ER* 也需于4°C保存。其他所有試劑成分可置于常溫下保存（22-25°C），本試劑盒自購(gòu)買(mǎi)之日起可保存12個(gè)月。
EZgeneTM無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒大提異丙醇沉淀法操作步驟：
1、將初搖的100 µL 加入到100 -200 mL的LB培養(yǎng)基（含適量***），37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。
2、室溫下5,000 x g離心10 min，收集菌體，將上清倒掉，并將收集管倒扣在紙巾上以除去殘留在菌體表明的培養(yǎng)基，將上清完全去除。
3、加入 10mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液槍或渦流震蕩充分懸浮**細(xì)胞。再向懸浮的菌液中加入0.5 mL 的Buffer ER，反轉(zhuǎn)5-10次，混合均勻。37°C溫育10min。
4、加入 9mL Buffer B1, 溫和地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5 min至溶液粘??而澄清，加入1mL Buffer D1，溫和地反轉(zhuǎn)5次，靜止5 min。
5、加入 2.4 mL Buffer N3, 立即反轉(zhuǎn)多次，至溶液充分混勻，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
6、將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī)，在室溫下 >14,000 x g 離心10 min。
7、小心吸取離心后的上清液至 50 mL 離心管中（避免吸起沉淀），加入0.1倍體積的EndoClean Buffer,，用手迅速顛倒混勻?；靹蚝蟊?0 min，其間不時(shí)搖勻(若EndoClean Buffer粘稠難吸，可將槍頭剪掉頭后再吸取)。
注：加入EndoClean Buffer后溶液變紅并渾濁，冰浴后變清亮。
8、取出后65oC溫浴5 min左右，使溶液變渾濁，室溫下(務(wù)必使溶液溫度恢復(fù)到23oC以上，否則離心后溶液不分層)，10,000 x g離心5 min（也可在2,500 x g離心15 min)。此時(shí)溶液分為兩層，上層水相含有質(zhì)粒，下層紅色有機(jī)相含有內(nèi)**。
9、小心將上層水相轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的50 mL管中（避免吸取下層紅色有機(jī)相），加入0.1倍體積的3M NaAC (pH=5.2) 或者3M KAC(pH=5.2)和0.7-1倍體積的異丙醇，用手迅速顛倒混勻。
10、4°C ，大于14,000 x g 離心20 min，，這時(shí)候?qū)⒊霈F(xiàn)質(zhì)粒DNA沉淀，小心倒去上清，沉淀上殘留的上清用槍頭吸干。
11、加入5 mL Buffer KB，將沉淀輕輕彈起，室溫放置約5 min，4°C 10,000~12,000 x g 離心 5 min，小心倒去上清，沉淀上殘留的上清用槍頭吸干。
12、加入5 mL 70% 乙醇，將沉淀輕輕彈起，室溫放置約5 min，4°C 10,000~12,000 x g 離心 5 min，將上清小心倒出，沉淀上殘留的上清用槍頭吸干，重復(fù)步驟10。
13、4°C 5,000 x g 離心1 min，用槍頭將殘留的上清吸干。
14、將離心管在空氣中風(fēng)干，或者置于55°C烘箱中 5 min，以徹底去除殘留酒精。
15、加入1-1.5 mL Endofree Elution Buffer 或者 ddH2O ，可置于65°C水浴或用寬口吸管輕輕吹打輔助溶解。
16、16. DNA濃度計(jì)算如下：DNA濃度 = 50 μg/mL ×OD260 × {稀釋倍數(shù)} 注：純化的質(zhì)粒的OD260/OD280的比值在1.7-1.9之間，如果用水溶解，OD260/OD280會(huì)偏低，但并表示DNA純度低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響OD比值。
高純度無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒大提試劑盒（沉淀法）操作流程：
- 溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買(mǎi)風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買(mǎi)前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
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