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- 產(chǎn)品名稱：無內(nèi)**快速質(zhì)粒超大量提取試劑盒Mega10
- 產(chǎn)品型號：PD1624-01
- 產(chǎn)品展商：Biomiga
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- 產(chǎn)品文檔：無相關文檔
- 發(fā)布時間：2012-11-20
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簡單介紹
無內(nèi)**快速質(zhì)粒超大量提取試劑盒Mega10（EndoFree Plasmid ezFlow ezFilter Mega10 Kit）處理1000-2000mL的菌液，可獲得10mg的質(zhì)粒DNA。
產(chǎn)品描述
無內(nèi)**快速質(zhì)粒超大量提取試劑盒Mega10（EndoFree Plasmid ezFlow ezFilter Mega10 Kit）處理1000-2000mL的菌液，可獲得10mg的質(zhì)粒DNA。
無內(nèi)**快速質(zhì)粒超大量提取試劑盒Mega10組分：
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Catalog #
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PD1624-01
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Preps
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2
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DNA Unit
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2
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Filter Unit
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2
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Replacement Cup
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4
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Buffer A1
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220 mL
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Buffer B1
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220 mL
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Buffer N3
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70 mL
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Buffer KB
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110 mL
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Buffer RET
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440 mL
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RNase A (20 mg/mL)
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22 mg(1.1 mL)
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Endofree Elution Buffer
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60 mL
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User Manual
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1
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保存條件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
注意事項：
1、質(zhì)?？截悢?shù)：純化中低拷貝的質(zhì)粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和Endofree Elution Buffer。
2、轉(zhuǎn)化菌: 若為-70℃甘油凍存的菌，請先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個菌落進行培養(yǎng)。
3、切勿直接取凍存在4℃的菌進行培養(yǎng)。
4、杯結合能力：10 mg
無內(nèi)**快速質(zhì)粒超大量提取試劑盒Mega10操作簡明步驟：
1、取500 µL新鮮的菌液接種到 1,200-1,500 mL (勿超過 500 mL)的LB培養(yǎng)基（含適量***），37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
2、加入100 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保**沉淀重新懸浮。
3、加入 100 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
4、加入30 ml Buffer N3, 立即反轉(zhuǎn)幾次至出現(xiàn)絮狀白色沉淀。渦漩震蕩10 秒。充分混勻后，溶液將會變的 顏色均一，如果此時溶液顏色不均一，均局部顏色過深，建議將溶液輕甩幾次，以充分混合溶液，
5、將雙層Filter unit與500 mL或1000 mL的**瓶(Corning# 430518 or 430282 or equivalent) 連接，旋緊，再將此裝置與真空負壓裝置連接。
6、先將步驟“5”中底部較澄清的裂解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至雙層Filter unit中，靜置5分鐘后打開真空裝置，使負壓由低到高，5分鐘后增至*大（0.04 Mpa）
7、當大部分裂解液已被過濾時，關掉真空負壓裝置，等候1分種，拆卸裝置，移去雙層Filter unit。
8、再將DNA unit杯與一個新的**的500 mL或1000 mL的**螺口標準瓶連接，旋緊。并將過濾嘴與真空負壓裝置連接。在步驟“7”中收集到的裂解液中加入1倍體積的Buffer RET (如220 mLBuffer RET加入220 mL的上清液中), 120 mL100%乙醇，立即混合均勻，立即將一半倒入DNA unit杯中，開啟負壓裝置，進行過濾吸附操作。
9、再將剩下一半倒入DNA unit杯中，當所有裂解液已過濾完，再維持真空1分鐘后，關掉負壓裝置。
10、向DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB，*大負壓（0.04Mpa）1分鐘，使液體完全通過DNA Unit 杯。
11、在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇，*大負壓（0.04Mpa）1分鐘，使乙醇完全通過DNA Unit杯。重復此操作步驟一次。
12、在DNA Unit杯中加入80 mL無水乙醇，*大負壓1分鐘，關掉負壓裝置，倒掉瓶子中的廢液，將DNA Unit杯重新連接至標準瓶上，開啟負壓裝置至*大負壓，真空抽20分鐘，以充分去除殘留的乙醇。
13、關掉負壓裝置，靜置一分鐘，移去標準瓶，將DNA Unit 連接至一個新的50 mL的離心管中，并旋緊。
14、加入20 mL Endofree Elution Buffer 到DNA Unit杯的膜上，室溫放置2分鐘，打開負壓裝置至*大（0.04 Mpa）洗脫DNA。此時會收集到10~12 mＬ洗脫液，這是1st 洗脫液。
15、關掉負壓裝置，將DNA Unit連接至一個新的50 mL的離心管中，加入5 mL Endofree Elution Buffer 到DNA Unit杯的膜上，室溫靜置2分鐘，開啟負壓裝置至*大（0.04 Mpa）洗脫DNA。此時會收集到約2~4 mL洗脫液，這是2nd洗脫液。
無內(nèi)**質(zhì)粒超大量提取試劑盒Mega10操作流程：
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