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- 產(chǎn)品名稱：無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒小量提取試劑盒
- 產(chǎn)品型號(hào)：PD1212-02
- 產(chǎn)品展商：Biomiga
- 產(chǎn)品價(jià)格：0.00 元
- 折扣價(jià)格：0.00 元
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- 發(fā)布時(shí)間：2018-07-08
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簡(jiǎn)單介紹
無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒小量提取試劑盒(EndoFree plasmid mini kit)處理5-12mL的菌液，可獲得30-70μg的質(zhì)粒DNA。
產(chǎn)品描述
無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒小量提取試劑盒(EndoFree plasmid mini kit)處理5-12mL的菌液，可獲得30-70µg的質(zhì)粒DNA。
無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒小量提取試劑盒組分：
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Catalog #
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PD1212-02
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Preps
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250
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ezBind Columns
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250
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Buffer A1
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125 mL
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Buffer B1
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125 mL
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Buffer N3
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175 mL
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Buffer KB
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135 mL
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DNA Wash Buffer*
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54 mL
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EndoClean Buffer
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40 mL
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Endofree Eluiton Buffer
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30 mL
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RNase A(20 mg/mL)
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12.5 mg(625 µL)
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User Manual
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1
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保存條件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
注意事項(xiàng)：
1、質(zhì)粒拷貝數(shù): 純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,N3,相同體積的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer .
2、轉(zhuǎn)化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌，請(qǐng)先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
3、切勿直接取凍存的菌種進(jìn)行培養(yǎng)。
無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒小量提取試劑盒操作簡(jiǎn)明步驟：
1、接種新鮮的單個(gè)菌落到3-12 mL的LB培養(yǎng)基 (含適量***)，37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。
2、室溫下10,000 x g離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
3、加入450 µL Buffer A1 (確保已加入RNase A)，用移液器或渦流震蕩確保菌體充分懸浮。
4、加入 450 µL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
5、加入100 µL Buffer N3, 立即反轉(zhuǎn)5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
6、將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī)，在室溫下13,000 rpm離心10分鐘(若上清中仍有白色沉淀，可翻轉(zhuǎn)后再次離心5分鐘)。 7、定量吸取離心后的上清液至新的1.5mL管中，加入0.1 volume的EndoClean Buffer，混勻后冰浴10分鐘，其間不時(shí)搖勻(若EndoClean Buffer粘稠難吸，可將槍頭剪掉頭后再吸取)。
8、室溫下(冰浴取出后務(wù)必使溶液溫度恢復(fù)到23oC以上，否則溶液不分層，為保證分層效果，可直接在65oC溫育5分鐘)13,000 rpm離心10分鐘。此時(shí)溶液分為兩層，上層水相含有質(zhì)粒，下層紅色有機(jī)相含有無(wú)內(nèi)**。
9、將上層水相轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的2.0mL管中，加入450µL的Buffer N3及400µL的100% ethonal，用手用力甩3次以混勻。 10、將溶液700 µL轉(zhuǎn)移至帶有收集管的DNA柱中，室溫下13,000 rpm 離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步驟至全部溶液轉(zhuǎn)移至DNA柱中。
11、可選: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
12、向離心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer (確保已加入無(wú)水乙醇)，室溫下，13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“12”。
13、將離心柱放回高速離心機(jī)中，13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
14、將離心柱轉(zhuǎn)至一個(gè)新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入50~100 µL (體積>50 µL) 的Endofree Elution Buffer，洗脫質(zhì)粒DNA。將離心管中的洗脫液再次加到DNA柱的正中間，室溫放置1分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，收集洗脫液到同一個(gè)離心管中。
無(wú)內(nèi)**質(zhì)粒小量提取試劑盒操作流程：
- 溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
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