產品描述

　　DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，*佳濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI(橙色熒光)，DiO(綠色熒光)，DiD(紅色熒光)和 DiR (深紅色熒光)這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在活體成像中用來示蹤。

　　　　 * Omega濾光器由Omega公司提供(www. omegafilters.com);Chroma濾光器由Chroma公司提供(www. chroma.com)。

　　**DiR的發(fā)射波長肉眼不可見，所以需要配備CCD鏡頭或其他的近紅外檢測儀器。

　　使用方法

　　1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細胞膜染色液制備

　　(1)配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

　　注意：未使用的儲存液保存在-20 ^oC，避免反復凍融。

　　(2)工作液制備：用合適的緩沖液(如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)稀釋儲存液，配制濃度為1～

　　5 µM的工作液。

　　注意：工作液的*終濃度是根據(jù)不同細胞和實驗的經驗來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找*佳條件。

　　2. 懸浮細胞染色

　　(1)懸浮細胞密度為 1 × 10⁶/mL加入到工作液中。

　　(2)在37 ℃培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，不同的細胞*佳培養(yǎng)時間不同。

　　(3)染色細胞試管在1000～1500轉離心5分鐘。

　　(4)傾倒上清液，再次緩慢加入預溫37℃的培養(yǎng)液。

　　(5)重復(3)，(4)步驟兩次以上。

　　3. 粘壁細胞的染色

　　(1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。

　　(2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

　　(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

　　(4)在37 ℃培養(yǎng)細胞 2～20分鐘，不同的細胞*佳培養(yǎng)時間不同。

　　(5)吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

　　4. 顯微鏡檢測

　　(1)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

　　(2)多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

　　a) DiI和DiO=Omega XF52，Chroma 51004;

　　b) DiI和DiD=Omega XF92，Chroma 51007;

　　c) DiI，DiO和DiD=Omega XF93，Chroma 61005

　　5. 流式細胞儀的檢測

　　DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細胞可以分別用經典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。

　　儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。