1． 加樣方面（混勻，不要有氣泡，管壁上不要有液體） 

2． 試劑方面（冷凍，不宜反復(fù)凍融超過3次；可分裝） 

3． 使用非肝素鈉抗凝劑采血管 

4． 實驗室方面（實驗做完注意通風(fēng)、84清理臺面、紫外線**） 

5． 注意污染（平常配試劑管蓋的放置不要污染、加樣時指甲及手套不要碰到管內(nèi)壁） 

實驗操作步驟

1.室溫融解；

2.取 血清（或標(biāo)準(zhǔn)品）50ul 加入 50ul 核酸提取液 先 震蕩混勻10秒 然后 6000轉(zhuǎn)瞬間離心一下（等離心機轉(zhuǎn)速到了接近6000按停止）99度水煮或干浴10分鐘，稍微彈碎；然后13000轉(zhuǎn)離心10分鐘保留上清液備用 

3.配混合液 

  取 N*36ul 混合液 + N*0.4ul TAQ酶混勻 （先 震蕩混勻10秒 然后 6000轉(zhuǎn)瞬間離心） （N為管數(shù)，實際上我們要取N+1 因為加樣管壁上會沾液不多配會導(dǎo)致*后一個有誤差 例如有10個樣本則取11*36+11*0.4；） 

4.取上述混合液36.5ul分別加入pcr反應(yīng)管 不要有氣泡 管壁不要有水珠

5.加樣 取4ul上清液 加入pcr管  加樣槍在液體里面反復(fù)打個7~8下  *后在離心機 稍微離一下6000轉(zhuǎn)瞬間離心 6.上機反應(yīng)  檢查管壁水珠 氣泡

實驗結(jié)果方面

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)至少為-0.99  越小越好

2.根據(jù)曲線分析結(jié)果（曲線是否穩(wěn)，無波浪）38循環(huán)曲線抬頭為陰性

實線抬頭 曲線不抬頭為YMDD變異 （實線---病毒量  虛線---判斷有無變異）

  21個循環(huán)值大概為7次方 后面加3.5個循環(huán) 減少一個次方  即24.5左右為6次方...... 

友情提示：上述操作不一定全正確，請自行參考各試劑廠試劑說明書以及檢驗方面相關(guān)資料。

*PCR-DNA實驗注意事項*PCR-DNA實驗注意事項*PCR-DNA實驗注意事項*PCR-DNA實驗注意事項*PCR-DNA實驗注意事項*PCR-DNA實驗注意事項*