活體動物體內成像技術是指應用影像學方法,對活體狀態(tài)下的生物過程進行組織、細胞和分子水平的定性和定量研究的技術。小動物活體成像是近年來在生物醫(yī)**面非?;钴S和前沿的領域,在研究細胞行為,**活性和代謝,**的進展等方向取得了**性的進步。分為生物發(fā)光成像(以Caliper和Xengon儀器為代表)和熒光成像(以KODAK和CRI儀器為代表)。
Junchenght提供近紅外的熒光成像染料及其與小分子**和生物大分子的熒光標記服務,并提供生物發(fā)光底物蟲熒光素(D-luciferin)和腔腸素(coelentarizine)。
熒光成像的推薦步驟:
1)SPF級 BALB/C裸鼠,6~8 周齡,18~20克,實驗前24 h 自由進食、飲水。
2)于實驗裸鼠腹腔內注射2%****鈉300μL(215 mg/ kg)麻醉動物。將裸鼠俯臥位平放于小動物多光譜活體成像系統(tǒng)的記錄暗箱中。實驗時將Cy7或Cy7標記的生物分子或***好溶于水(或甲醇/乙醇/乙二醇,有時DMSO 200uL能把小鼠殺死)稀釋后,于裸鼠尾靜脈注射200μL(濃度0.5 mg/mL)[*佳用量和時間需要客戶根據(jù)自己的儀器和**試劑等條件優(yōu)化]。每5min 記錄1 張動物在體內發(fā)射熒光的成像圖片,分析熒光**的分布情況。對照鼠不注射**,進行同時記錄。記錄結束后迅速解剖裸鼠的心、肝、脾、肺、腎等臟器,進行成像。
3)Cy7 檢測時激發(fā)波長700~770 nm帶通,發(fā)射波長790 nm長通。液晶可調諧濾光片掃描范圍 780~950 nm,掃描步進10 nm。曝光時間為500 ms。
不同的**代謝時間不一樣,注射入裸鼠體內,熒光立即分布全身,然后逐步向膀胱聚集,呈現(xiàn)顯著的腎排泄的特點一般4~6小時,快的只有30分鐘;如果是骨骼和鼻腔等部位靶點的Cy7標記**,有客戶反映一周后活體成像系統(tǒng)仍能檢測到熒光成像。
器官切片觀察:將解剖的器官迅速放置于4%多聚甲醛固定4小時以上,0%,20%,30%PBS蔗糖依次沉底,20μm切片,多聚賴氨酸洗過的載玻片貼片,晾干,DAPI染色。共聚焦顯微鏡觀察,激光器為氦氖 633 nm。
熒光試劑
目錄號 產(chǎn)品名稱
D1050 Cy3
D1051 Cy3, SE
D1053 Cy5
D1054 Cy5, SE
D1056 Cy5.5
D1057 Cy5.5, SE
D1058 Cy7
D1059 Cy7, SE
D1003 Alexa Fluor 488
D1023 Alexa Fluor 488琥珀酰亞胺酯
D1006 Alexa Fluor 555
D1028 Alexa Fluor 555琥珀酰亞胺酯
D1009 Alexa Fluor 647
D1031 Alexa Fluor 647琥珀酰亞胺酯
D1012 Alexa Fluor 680
D1015 Alexa Fluor 750
D1035 Alexa Fluor 680琥珀酰亞胺酯
D1037 Alexa Fluor 750琥珀酰亞胺酯
D22070 DiR碘化物
生物發(fā)光試劑
目錄號 產(chǎn)品名稱
D21150 腔腸素native
D21151 腔腸素cp
D21152 腔腸素f
D21153 腔腸素h
D21154 腔腸素hcp
D21155 腔腸素n
D13415 D-氨基蟲熒光素
D12501 D-蟲熒光素游離酸
D12505 D-蟲熒光素鉀鹽
D12509 D-蟲熒光素鈉鹽
*小動物活體成像領域的應用*小動物活體成像領域的應用*小動物活體成像領域的應用*小動物活體成像領域的應用*小動物活體成像領域的應用*